[发明专利]一种有效抑制细胞抗氧化生物活性的复合型抑制剂

说明书

本发明属于细胞生物学技术领域，公开了一种有效抑制细胞抗氧化生物活性的复合型抑制剂。该复合型抑制剂包含以下成分：L‑丁硫氨酸‑亚砜亚胺(1.5mM)、3‑氨基‑1，2，4‑三氮唑(10mM)、二乙基二硫代氨基甲酸钠盐三水(5mM)、巯基琥珀酸(5mM)、卡莫司汀(5μM)。本发明复合型抑制剂的制备方法为：按工作浓度计算各成分重量，称取后充分混匀，溶于所需培养基，经微孔滤膜抽滤，即可使用。本发明的复合型抑制剂可显著降低抗氧化剂对细胞总抗氧化能力的诱导作用，并显著减弱了抗氧化剂对活性氧ROS形成的抑制作用。单独添加该抑制剂对细胞无明显毒副作用。同时该复合型抑制剂为水溶性，可直接溶于细胞培养液。

技术领域

本发明属于细胞生物学技术领域，涉及一种有效抑制细胞抗氧化生物活性的复合型抑制剂的制备及使用方法。

背景技术

活性氧自由基(reactive oxygen species，ROS)是体内由氧形成的具有高反应活性的一类物质的总称，对细胞中的生物大分子如DNA、蛋白质及脂质均能造成损伤。一般来说，ROS可分为3类，即以非自由基形式存在的过氧化氢(H₂O₂)、超氧阴离子(O₂·-)和羟自由基(·OH)。ROS的产生途径包括内源性的氧化代谢、营养缺乏、局部缺血和外源性的电离辐射和紫外辐射等环境应激。事实上，少量的ROS对一些基本的细胞生命活动过程如细胞增殖、细胞信号传导、激素合成等是必须的。但是，但当机体的抗氧化能力降低或体内ROS产生过量时，就会打破体内氧化和抗氧化系统之间的平衡关系，造成组织细胞的氧化损伤，进而诱发动脉粥样硬化、糖尿病、恶性肿瘤等多种疾病。

为了缓解氧化应激造成的危害，人们开发了众多抗氧化剂(antioxidants)。抗氧化剂是指能减轻或阻止氧化作用的分子。与氧化剂相对，抗氧化剂通常是还原剂，包括维生素C、硫醇、多酚等多种类型。抗氧剂作为生物体内非酶类抗氧化系统的成份，可直接与活性氧发生反应，或激活细胞内源抗氧化酶系统，进而起到抑制或清除ROS的作用。因此，给生物体补充外源性抗氧化剂能够有效地维持细胞正常结构与功能，并预防氧化应激相关疾病的发生。

抗氧化剂的研发虽已取得许多成果，但人们对抗氧化剂的作用机制尚缺乏根本性认识。特别是，对于“抗氧化剂是否直接抑制氧化应激的发生还是间接提高了细胞氧化耐受能力”这一关键问题尚无明确答案。研究表明，长期或过量的氧化应激不仅会破坏细胞中的抗氧化系统，而且还会减弱抗氧化剂对ROS的清除效果；但有趣的是，某些抗氧化剂(如褪黑素)在此情况下仍能抑制细胞氧化损伤，说明这类抗氧化剂对细胞的保护作用可通过抗氧化以外的途径来实现。为探明抗氧化非依赖性的机制，研究者需要将细胞本身的抗氧化生物活性进行抑制。目前市场上存在各种针对细胞内源抗氧化活性的抑制剂，但具有以下不足：1.细胞内的抗氧化体系十分复杂，研究者很难通过抑制某一特定抗氧化酶来抑制细胞整体的抗氧化能力；2.一些抑制剂具有一定毒性，会对细胞产生副作用；3.抑制剂价格普遍较贵；4.抑制剂实际用量不多，但是购买的产品规格普遍较大，剩余的抑制剂用不完容易过期失效；5.抑制剂多为粉末，配制过程繁琐，且容易造成细胞污染；6.某些抑制剂的特异性不强，可能影响细胞其他功能；7.许多抑制剂很难溶解，无法用于细胞实验；8.由于不同文献报道、试剂公司对抑制剂的功能说法不一致，研究者购买时难以正确选择。

发明内容

(一)要解决的技术问题

本发明的目的是针对现有技术存在的问题，为有效抑制细胞的抗氧化生物活性，而提供一种作用全面、使用方便、抑制效率高、无副作用的复合型抑制剂的制备及使用方法。

(二)技术方案