[发明专利]抗PD-L1纳米抗体及其编码序列、制备方法和应用

说明书

本发明公开了抗PD‑L1纳米抗体及其编码序列、制备方法和应用，所述抗体VHH链的氨基酸序列如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:20所示。与现有技术相比，本发明具有以下优点：(1)本发明所述抗PD‑L1纳米抗体具有高度特异性，检测敏感性高；(2)所述抗体能够在大肠杆菌中高效表达，因而为后续的免疫试剂及肿瘤药物组合物的量产化生产提供基础。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，涉及一种新的PD-L1抗体或其功能性片段，具体为抗PD-L1纳米抗体及其编码序列、制备方法和应用。

背景技术

程序性死亡因子1配体1(programmed death 1ligand 1，PD-L1)又称CD274，B7-H1，为B7家族成员，是PD-1的配体，属于I型跨膜蛋白。在正常情况下，T细胞表面的PD-1能够抑制T淋巴细胞的功能，从而抑制自身免疫应答，防止自身免疫性疾病的发生。但在肿瘤中，肿瘤细胞表达的PD-L1与T细胞表面的PD-1结合后，能通过对T淋巴细胞的抑制作用，导致T细胞增殖下调,甚至诱导T细胞凋亡,促进肿瘤的免疫逃逸。而阻断PD-1/PD-L1负调控通路,可激活免疫系统功能，杀伤肿瘤细胞。目前市面上已有多种靶向PD-L1单克隆抗体，如罗氏PD-L1单克隆抗体atezolizumab(Tecentriq)，阿斯利康公司研发的Durvalumab(商品名：Imfinzi)，辉瑞/默克的avelumab(商品名：Bavencio)，这些PD-L1单抗在临床中已经取得成功应用。但是单克隆抗体具有开发周期长，生产成本高，分子量大，难以穿透组织等缺点。这些因素均限制了其在临床应用中的普及，而纳米抗体是目前最小的抗体分子，具有稳定性好，成本低，水溶性好，可穿过血脑屏障等优点。而且选择wasabi作为表达纳米抗体的融合片段，具有表达量高，成本低,便于检测应用等优点。

发明内容

解决的技术问题：为了克服现有技术的不足，获得一种检测敏感度高，稳定性好，成本低，易于实际应用的纳米抗体，本发明提供了抗PD-L1纳米抗体及其编码序列、制备方法和应用。

技术方案：抗PD-L1纳米抗体，所述抗体VHH链的氨基酸序列如SEQ ID NO:2、SEQID NO:11或SEQ ID NO:20所示。

抗PD-L1纳米抗体，所述抗体VHH链包括框架区和互补决定区；其中：

所述框架区包括以下4段氨基酸序列：FR1、SEQ ID NO:3，FR2、SEQ ID NO:5，FR3、SEQ ID NO:7，FR4、SEQ ID NO:9；所述互补决定区包括以下3段氨基酸序列：CDR1、SEQ IDNO:4，CDR2、SEQ ID NO:6，CDR3、SEQ ID NO:8；

或者，所述框架区包括以下4段氨基酸序列：FR1、SEQ ID NO:12，FR2、SEQ ID NO:14，FR3、SEQ ID NO:16，FR4、SEQ ID NO:18；所述互补决定区包括以下3段氨基酸序列：CDR1、SEQ ID NO:13，CDR2、SEQ ID NO:15，CDR3、SEQ ID NO:17；

或者，所述框架区包括以下4段氨基酸序列：FR1、SEQ ID NO:21，FR2、SEQ ID NO:23，FR3、SEQ ID NO:25，FR4、SEQ ID NO:27；所述互补决定区包括以下3段氨基酸序列：CDR1、SEQ ID NO:22，CDR2、SEQ ID NO:24，CDR3、SEQ ID NO:26。

编码抗PD-L1纳米抗体的基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:10或SEQID NO:19。

重组载体，所述重组载体中包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:19序列。

宿主细胞，所述宿主细胞中包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:19序列。