[发明专利]流行性造血器官坏死病毒（EHNV）的RAA恒温荧光检测方法及试剂

权利要求书

1.一种流行性造血器官坏死病毒（EHNV）核酸的检测试剂盒，包括：流行性造血器官坏死病毒正向引物、反向引物以及特异性荧光探针，其中所述流行性造血器官坏死病毒正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示、所述流行性造血器官坏死病毒反向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述特异性荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3，其5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。

2.根据权利要求1所述的核酸检测试剂盒，所述特异性荧光探针的荧光报告基团选自FAM、VIC、JOE、TET、CY3、CY5、ROX、Texas Red或LC RED460中的一种，荧光淬灭基因选自BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcy1或Tamra中的一种。

3.根据权利要求1和2所述的核酸检测试剂盒，还包括引物混合液、特异性荧光探针、ABuffer、B Buffer、RAA干粉试剂、流行性造血器官坏死病毒标准品和DEPC处理水中至少一种。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，所述的逆转录体系由RTE逆转录酶、RNA酶抑制剂组成。

5.根据权利要求3所述的试剂盒，其中，所述A Buffer为20% PEG ；B Buffer为280mMMgAc。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其中，所述的RAA干粉试剂的成分如下：1mmol/LdNTP、90ng/μL SSB蛋白、120ng/μL recA重组酶蛋白（SC-recA/BS-recA）或30ng/μL Rad51、30ng/μL Bsu DNA聚合酶， 30ng/mL RTE逆转录酶、 100mmol/L Tricine、20% PEG、5mmol/L二硫苏糖醇、100ng/μL肌酸激酶、Exo核酸外切酶。

7.根据权利要求1-5任意一项所述的核酸检测试剂盒，流行性造血器官坏死病毒标准品为含有流行性造血器官坏死病毒保守区基因部分序列的阳性质粒。

8.根据权利要求6所述的试剂盒，所述含有流行性造血器官坏死病毒保守区基因部分序列的阳性质粒的序列如SEQ ID NO.4所示。

9.流行性造血器官坏死病毒的RAA恒温荧光检测方法，提取待测样品的RNA，以待测样品的RNA 为模板，在流行性造血器官坏死病毒的正向引物、反向引物、特异性荧光探针及RAA干粉试剂、A Buffer、B Buffer和DEPC处理水存在下进行实时荧光RAA反应，根据实时荧光RAA扩增曲线分析待测样品；其中所述流行性造血器官坏死病毒正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1 所示、所述流行性造血器官坏死病毒反向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2 所示，所述特异性荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID No.3，其5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。

10.根据权利要求9所述，流行性造血器官坏死病毒核酸RNA提取采用传统的Trizol-RNA试剂或者采用等效的RNA提取试剂盒。