[发明专利]一种人脂肪干细胞条件培养基的制备方法在审
| 申请号： | 201811071100.8 | 申请日： | 2018-09-13 |
| 公开（公告）号： | CN109161521A | 公开（公告）日： | 2019-01-08 |
| 发明（设计）人： | 郑桂纯;陈志胜;赵姝灿;黄丽贞;张晓芳 | 申请（专利权）人： | 佛山科学技术学院 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 王国标 |
| 地址： | 528000 广东省佛山市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 条件培养基 脂肪干细胞 制备 上清液 人皮肤成纤维细胞 无血清培养基 延缓皮肤衰老 应用 美容护肤品 细胞培养基 传代培养 分离培养 离心处理 血清 过敏 衰老 过滤 生产 | ||
1.一种人脂肪干细胞条件培养基的制备方法，其特征在于包括如下操作步骤：
1)分离培养人脂肪干细胞：取人脂肪组织，PBS溶液清洗、离心处理5min，取下层脂肪组织，加入Ⅰ型胶原蛋白酶溶液消化，离心处理，去除上层油脂和下层胶原酶溶液，然后用PBS溶液重悬沉淀，吹散后用200目细胞滤网过滤，离心处理10min，弃上清，加入完全培养基重悬，接种于培养板中传代培养；
2)条件培养基制备：取传代培养中的P3至P6代次人脂肪干细胞，待人脂肪干细胞生长至75～85％培养基时，弃去培养基，PBS溶液清洗，加入无血清培养基继续培养48h后收集细胞培养基上清液，对上清液进行离心处理20min，用0.22μm滤器过滤后获得人脂肪干细胞条件培养基，4℃保存备用。
2.根据权利要求1所述的一种人脂肪干细胞条件培养基的制备方法，其特征在于：步骤1)中所述完全培养基为含有10％胎牛血清的低糖DMEM培养基。
3.根据权利要求1所述的一种人脂肪干细胞条件培养基的制备方法，其特征在于：步骤2)中所述无血清培养基为含有双抗的DMEM/F12基础培养基。
4.根据权利要求1所述的一种人脂肪干细胞条件培养基的制备方法，其特征在于：步骤1)中所述Ⅰ型胶原蛋白酶溶液为等体积现配的预热后浓度为0.1％的Ⅰ型胶原蛋白酶溶液。
5.根据权利要求1所述的一种人脂肪干细胞条件培养基的制备方法，其特征在于：步骤1)中所述消化的时间为60min，温度为37℃。
6.根据权利要求1所述的一种人脂肪干细胞条件培养基的制备方法，其特征在于：步骤1)中所述离心处理的离心速度为2000rpm。
7.根据权利要求1所述的一种人脂肪干细胞条件培养基的制备方法，其特征在于：步骤2)中所述离心处理的离心速度为3000rpm。
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