[发明专利]一种分离纯化鼠李糖脂的方法

权利要求书

1.一种分离纯化鼠李糖脂的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将鼠李糖脂发酵液置于离心管中离心富集菌体，收集无菌的发酵液上清液；

（2）在步骤（1）收集的发酵液上清液中加入无水乙醇；

（3）将步骤（2）中加入无水乙醇的发酵液上清液加入磁力搅拌子，放置于磁力搅拌器上搅拌；

（4）将（3）中搅拌处理后的溶液置于离心管中离心富集沉淀蛋白，收集去除蛋白的上清液，即去除蛋白的鼠李糖脂发酵液；

（5）在（4）中收集的去除蛋白的鼠李糖脂发酵液中加入磷酸调节pH使鼠李糖脂析出，产生沉淀，静置一段时间；

（6）将（5）中产生沉淀的发酵液置于离心管中离心富集鼠李糖脂沉淀，舍弃上清液，将产生的沉淀烘干，得到鼠李糖脂沉淀产品；

（7）将（6）中得到的鼠李糖脂沉淀产品均匀的打撒于石油醚中，溶解鼠李糖脂中的杂质；

（8）将（7）中石油醚和鼠李糖脂沉淀产品混合物置于离心管中离心，使固液分离，收集鼠李糖脂固体，得到提纯的鼠李糖脂产品。

2. 根据权利要求1所述的一种分离纯化鼠李糖脂的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，将鼠李糖脂发酵液在10000 rpm，4℃条件下离心20min。

3.根据权利要求1所述的一种分离纯化鼠李糖脂的方法，其特征在于，所述离心管为尖底离心管。

4.根据权利要求1所述的一种分离纯化鼠李糖脂的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，无水乙醇的添加量为鼠李糖脂发酵液体积的10%。

5.根据权利要求1所述的一种分离纯化鼠李糖脂的方法，其特征在于，所述步骤（3）中，搅拌的条件为250rpm搅拌9h。

6. 根据权利要求1所述的一种分离纯化鼠李糖脂的方法，其特征在于，所述步骤（4）、步骤（6）和步骤（8）中，将鼠李糖脂发酵液在6000 rpm，4℃条件下离心10 min。

7.根据权利要求1所述的一种分离纯化鼠李糖脂的方法，其特征在于，所述步骤（5）中所用的磷酸为分析纯级别磷酸；加磷酸调节pH至2。

8.根据权利要求1所述的一种分离纯化鼠李糖脂的方法，其特征在于，所述步骤（5）中，在4℃下静置18h。

9.根据权利要求1所述的一种分离纯化鼠李糖脂的方法，其特征在于，所述步骤（7）中，鼠李糖脂沉淀产品和石油醚的质量体积比为1/2~1/8（w/v）。

10.根据权利要求1所述的一种分离纯化鼠李糖脂的方法，其特征在于，还包括：取步骤（1）发酵液上清液、步骤（4）去除蛋白的鼠李糖脂发酵液、步骤（6）酸沉淀后的上清液和步骤（8）固液分离后的石油醚洗涤液，加入定量蒽酮硫酸试剂，沸水浴反应10min，控制紫外波长为620nm，利用酶标仪测试发酵液吸光度，代入用标准鼠李糖制作的标准曲线中计算鼠李糖脂浓度，计算鼠李糖脂损失率。