[发明专利]细胞冻存液、冻存复苏方法及其应用

权利要求书

1.一种细胞冻存液，其特征在于，应用于间充质干细胞和免疫细胞的冻存，所述细胞冻存液由酰基化ε-多聚赖氨酸、多元醇、平衡缓冲液和葡萄糖组成；

所述多元醇为甘油，所述酰基化ε-多聚赖氨酸为丁二酸酐酰基化ε-多聚赖氨酸；

所述平衡液缓冲溶液包含可溶性钠盐、可溶性钾盐、可溶性镁盐、可溶性钙盐、渗透压稳定剂、还原剂、氨基酸和活性代谢中间产物；

所述酰基化ε-多聚赖氨酸的质量浓度为10~200mg/mL，所述多元醇的体积占所述细胞冻存液体积的百分比为1%~20%，所述葡萄糖的含量为2-40mM，余量为所述平衡缓冲液；

所述平衡缓冲液中，所述可溶性钠盐含量为10~120mM、所述可溶性钾盐含量为10~120mM、所述可溶性镁盐含量为5~15mM，所述可溶性钙盐含量为0.1~1mM，所述渗透压稳定剂含量为0.01~40mM，所述还原剂含量为0.002~5mM，所述氨基酸含量为15~50mM，所述活性代谢中间产物的含量为1~10mM；

所述渗透压稳定剂为甘露糖醇，所述还原剂为维生素C、谷胱甘肽、N-乙酰-L-半胱氨酸和叔丁基对苯二酚，所述氨基酸为组氨酸和谷氨酸，所述活性代谢中间产物为α-酮戊二酸和腺苷。

2.根据权利要求1所述的细胞冻存液，其特征在于，所述酰基化ε-多聚赖氨酸的质量浓度为80~130mg/mL，所述多元醇的体积占所述细胞冻存液体积的百分比为10%~20%。

3.根据权利要求1所述的细胞冻存液，其特征在于，所述维生素C含量为0.5~2mM，所述N-乙酰-L-半胱氨酸含量为1~5mM，所述叔丁基对苯二酚含量为2~5µM。

4.根据权利要求1所述的细胞冻存液，其特征在于，所述组氨酸含量为20~50mM，所述谷氨酸含量为15~30mM。

5.根据权利要求1所述的细胞冻存液，其特征在于，所述平衡缓冲液组分还包括人血清白蛋白，所述平衡缓冲液中，所述人血清白蛋白的质量浓度为2~20mg/mL。

6.根据权利要求1所述的细胞冻存液，其特征在于，所述平衡缓冲液的pH为7.0~7.6。

7.一种细胞冻存复苏方法，其特征在于，包含以下步骤：

S1:取待冻存细胞悬液，离心收集细胞，利用权利要求1~6任一项所述的细胞冻存液对离心收集到的所述细胞进行重悬并调整所述细胞的浓度，获得细胞悬液；

S2:吸取所述细胞悬液分装于冻存管或冻存袋中，然后将所述冻存管或冻存袋冻存；

S3:取出所述冻存管或冻存袋，在30-40℃的条件下对所述冻存管或冻存袋进行解冻处理，得到复苏后的细胞。

8.根据权利要求7所述的细胞冻存复苏方法，其特征在于，在所述步骤S2中，将所述冻存管或冻存袋置于-82℃~-78℃中冻存。

9.根据权利要求8所述的细胞冻存复苏方法，其特征在于，将所述冻存管或冻存袋置于-82℃~-78℃中冻存至少3小时后移入液氮中冻存。

10.根据权利要求9所述的细胞冻存复苏方法，其特征在于，所述细胞悬液的浓度为1×10⁶~100×10⁶个/mL。

11.根据权利要求7所述的细胞冻存复苏方法，其特征在于，在所述步骤S2中，每个所述冻存管中装入0.2~1mL所述细胞悬液。

12.根据权利要求7所述的细胞冻存复苏方法，其特征在于，在所述步骤S2中，每个所述冻存袋中装入10~50mL所述细胞悬液。

13.一种如权利要求7~12任意一项所述的细胞冻存复苏方法在冻存干细胞中的应用。

14.一种如权利要求7~12任意一项所述的细胞冻存复苏方法在冻存免疫细胞中的应用。