[发明专利]一种发酵生产巴弗洛霉素A1的方法

权利要求书

1.一种发酵生产bafliomycins A1的方法，其特征在于，包括将发酵菌株接种于适宜发酵培养基中进行发酵培养的步骤；

所述发酵菌株为灰棕褐链霉菌，其分类命名为Streptomyces griseobrunneus FIM-Ba150115，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.15241，保藏日期为2018年1月18日。

2.根据权利要求1所述的发酵生产bafliomycins A1的方法，其特征在于，所述发酵培养基包括如下质量含量的组分：可溶性淀粉3.0-4.0％、蛋白胨1.5-3％、酵母粉1-2％、玉米浆干粉0.5-1.5％、碳酸钙0.2-0.3％，调pH值7.0-7.5。

3.根据权利要求2所述的发酵生产bafliomycins A1的方法，其特征在于，所述发酵培养基还包括0.025-0.3％的前体物。

4.根据权利要求3所述的发酵生产bafliomycins A1的方法，其特征在于，所述前体物选自异丁醇、异丁酸、醋酸铵、异亮氨酸、亮氨酸和/或缬氨酸。

5.根据权利要求1-4中任一项权利要求所述的发酵生产bafliomycins A1的方法，其特征在于，所述发酵培养的条件包括：控制转速200-400rpm，通气量0.08-1.2vvm，于25-30℃进行发酵培养。

6.根据权利要求5所述的发酵生产bafliomycins A1的方法，其特征在于，还包括将所述的灰棕褐链霉菌接种于种子培养基中进行种子液培养的步骤，所述种子培养基包括如下质量含量的组分：可溶性淀粉2.0％、蛋白胨2.0％、酵母粉1.0％、碳酸钙0.2％，调pH值7.2。

7.根据权利要求6所述的发酵生产bafliomycins A1的方法，其特征在于，还包括将所述的灰棕褐链霉菌接种于ISP2斜面培养基中进行保存的步骤，所述ISP2斜面培养基包括如下质量含量的组分：葡萄糖0.4％、 麦芽提取物1.0％、酵母提取物0.4％、琼脂1.8％，调pH值7.2。

8.根据权利要求7所述的发酵生产bafliomycins A1的方法，其特征在于，还包括将发酵液中bafliomycins A1进行提纯的步骤。

9.根据权利要求8所述的发酵生产bafliomycins A1的方法，其特征在于，所述提纯步骤包括：

(1)发酵结束后，取发酵液加入95％的乙醇进行浸泡，离心并弃菌渣，收集乙醇浸泡清液以0.5BV/h的速度上样于HP20大孔吸附树脂柱进行吸附，然后分别用6倍柱体积的水，和40％乙醇-水溶液来进行洗脱，洗脱流速为1BV/h，以除去部分杂质色素；随后用4倍柱体积的95％乙醇进行洗脱，收集洗脱液，浓缩得到膏状粗提物；

(2)取膏状粗提物加入少量甲醇超声溶解，后与G200-300目硅胶充分搅拌混匀，并真空干燥去除溶剂；并将伴有粗品的硅胶填装到G200-300目硅胶柱上层，然后分别用石油醚：乙酸乙酯＝8：1、石油醚：乙酸乙酯＝4：1、石油醚：乙酸乙酯＝2：1作为流动相进行梯度洗脱，分段收集洗脱液；

(3)将收集的洗脱液采用HPLC检测有效组分，合并相同组分后真空减压浓缩，收集浓缩液溶于DMSO后上样于DAC动态轴向压缩系统，经HPLC检测后合并目标产物，真空干燥后，得bafliomycins A1化合物纯品。

10.根据权利要求9所述的发酵生产bafliomycins A1的方法，其特征在于，所述DAC动态轴向压缩系统，填料为C18，流动相为70％乙腈-水溶液，控制流速10ml/min，检测波长247nm。