[发明专利]一种线粒体DNA提取试剂盒和方法

权利要求书

1.一种线粒体DNA的提取方法，其特征在于，其包括：

样本处理步骤：用悬浮液悬浮血浆样本经16000g速度离心10分钟后获取的沉淀，得到悬浮线粒体液；

消化步骤：往所述悬浮线粒体液中加入蛋白酶K和裂解液，进行消化，得到消化液；

DNA沉淀步骤：往消化液中加入无水乙醇，混匀，室温静置后，获取DNA沉淀；

洗涤步骤：用洗涤液洗涤DNA沉淀；

洗脱步骤：用洗脱液溶解DNA沉淀，溶解液即为线粒体DNA溶液；

其中，所述悬浮液为PBS缓冲液；

所述裂解液含有：20mM Tris-HCl(pH 8.0)、150mM NaCl、5mM EDTA、1.0％SDS以及1mg/ml RNA carrier；

所述洗脱液含有：10mM Tris-HCl和0.1mM EDTA；

所述洗涤液包括洗涤液1和洗涤液2，洗涤液1含有：5M盐酸胍，20mM Tris-HCL以及40％无水乙醇(v/v)，pH 6.6；洗涤液2含有：20mM NaCl，2mM Tris-HCL以及80％无水乙醇(v/v)，pH 7.5。

2.根据权利要求1所述的线粒体DNA的提取方法，其特征在于，在消化步骤中，悬浮线粒体液、蛋白酶K和裂解液的用量体积比为：(9-11):(0.9-1.1):(9-11)。

3.根据权利要求2所述的线粒体DNA的提取方法，其特征在于，

在DNA沉淀步骤中：往消化液中加入无水乙醇后，混匀，室温静置5-10分钟后，转移到有滤芯的离心管中，离心后，弃穿透液；

在洗涤步骤中：

往所述滤芯上加入洗涤液1，离心后，弃穿透液；再往所述滤芯上洗涤液2，离心后，弃穿透液；

在洗脱步骤中，往所述滤芯上加入洗脱液，室温静置后，离心，收集滤液。