[发明专利]快速鉴定出入境旅客携带狗皮、猫皮成分物品的试剂盒

说明书

本发明提供一种快速鉴定出入境旅客携带狗皮、猫皮成分物品的试剂盒包括样品处理体系、LAMP扩增反应体系、核酸免疫胶体金试纸条、阳性标准品、阴性标准品；检测步骤主要包括提取待测样品DNA、配制待测样品的LAMP检测反应体系、LAMP扩增反应、核酸免疫胶体金试纸条检测；操作简便、快速、精确、低价，不仅能够检测狗源性成分还能检测猫源性成分，同时又能有效区分其他常被作为皮具原料的反刍类的动物源，如狗、猫、马等等，对皮具中动物源性检测的特异性高，既可以通过核酸扩增保证检测的特异性和敏感性，又通过固相化的胶体金检测，实现直观性和简便性，非常适合用于出入境的口岸检验检疫人员进行现场检测。

技术领域

本发明涉及一种出入境关卡检测旅客携带违禁成分的新手段，特别是涉及一种快速鉴定出入境旅客携带狗皮、猫皮成分物品的试剂盒。

背景技术

根据2000年美国出台的《猫狗保护法》，美国禁止进口猫狗皮毛，对这种做法会最高处以1万美元的罚金。从2018年开始我国也开始逐渐颁布了一系列法律条文禁止进口和销售含有狗、猫的皮制成的皮鞋、皮衣等皮具，对疑似皮具一律要求提供对方国家相关机构出具的不含猫狗动物源性原料的证明，凡是不能提供的均需要退回处理。但是随着人民的生活水平的不断提高，人民对皮具、日用品等的质量和功效要求越来越高，越来越多的人在国外购买皮具、皮包、皮衣等携带入境。很多入境人员没有意识到违禁物品不能带入国内的重要性，常常更换购买物品的包装或伪装成牛皮、羊皮，将猫狗皮革制品与牛羊猪皮革制品区分开来本就并非易事，旅客的不配合导致检查人员更加无法有效快速检测其成分。

目前对旅客携带皮具中怀疑有猫狗成分时，一般需要进行测序方法或PCR方法。PCR虽然特异性和敏感性高，但样品前处理繁琐费时，实验周期长；需要特殊的仪器（实时定量PCR仪或普通PCR仪和凝胶电泳仪等），检测成本高；在一个反应体系中若对多种动物源进行鉴定，极易出现假阳性和假阴性，且需要专门的分析技术人员，检测场所也局限于有条件的实验室中，不能满足现场快速检测的需要。因此建立快速、灵敏、操作简便、无需仪器的检测方法对于口岸检验检疫人员现场检疫工作具有高度的意义。

环介导等温扩增技术，英文名称为loop-mediated isothermal amplification，缩写为LAMP。环介导等温扩增技术能在等温（60-65℃）条件下，短时间（通常是一小时内）内进行核酸扩增，是一种“简便、快速、精确、低价”的基因扩增方法。与常规PCR相比，不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程，是一种全新的核酸扩增方法，具有简单、快速、特异性强的特点。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于PCR技术，不依赖任何专门的仪器设备实现现场高通量快速检测，检测成本远低于荧光定量PCR。该技术即可以通过核酸扩增保证检测的特异性和敏感性，又通过固相化的胶体金检测，实现直观性和简便性，非常适合用于基层和现场检测目的。目前该技术在检测皮具中是否含有狗源和猫源性物质的应用还处于空白，有很大的应用前景。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种快速检测出入境旅客携带皮具中违禁成分的试剂盒，主要基于包括LAMP的扩增反应体系和胶体金试纸条两大技术，所述试剂盒用于解决现有技术中检查速度慢、检查手段复杂、结果不够准确的问题。

优选的，所述一种快速检测出入境旅客携带皮具中违禁成分的试剂盒包括样品处理体系、LAMP扩增反应体系、核酸免疫胶体金试纸条、阳性标准品、阴性标准品；所述样品处理体系包括皮革裂解液、蛋白酶K、Tris饱和酚、氯仿、乙酸钠、无水乙醇、75%乙醇；所述LAMP扩增反应体系包括待测样本的DNA，狗、猫特异性的LAMP引物组，LAMP扩增反应液；所述LAMP引物组包括：F3、B3组成的外引物对，FIP、BIP组成的内引物对，LF、LB组成的环引物对；所述LAMP引物组中的F3、B3组成的外引物对分别标记生物素和地高辛；