[发明专利]一种用于检测apoA I、apoB的试剂盒及其稳定剂的制备方法

说明书

本发明涉及一种用于检测apoA I、apoB的试剂盒及其稳定剂的制备方法，包括apoA抗体液、apoB抗体液和液体血清型恒定值校准液，还包括有稳定剂；按照重量份数，稳定剂包括海藻糖1‑5份，0.01mol/L磷酸盐缓冲液100‑200份，辣根过氧化物酶1‑5份，丙酸钠0.01‑0.1份，硫柳汞1‑5份。利用稳定剂增强抗体的稳定性，进而延长保存寿命和使用寿命，并且增强使用时的稳定性，并且海藻糖能够在生物体受到不良环境条件胁迫时，保护生物大分子结构和功能的稳定。

技术领域

本发明涉及医疗检测技术领域，具体涉及一种用于检测apoA I、apoB的试剂盒及其稳定剂的制备方法。

背景技术

载脂蛋白A I（apo A I）是apoA组最多的一种组份，apoA I 为单一多肽链，由243个氨基酸残基组成，分子量为28300D，是高密度脂蛋白（HDL）的主要载脂蛋白。HDL具有防止心脑血管疾病的常规检测项目。载脂蛋白B（apoB）是低密度脂蛋白（LDL）的主要蛋白质，而LDL增高是公认的致动脉粥样硬化的危险因子，因此，血清apoB的测定在临床上有着非常重要的作用，联合检测apo A I、apoB对早诊断、早预防、早治疗心脑血管疾病提供了可靠的依据。

已知测定apo A I、apoB的方法有层析法、电泳法、免疫分析法、其中层析法和电泳法操作繁琐，不能进行批量样本分析和直接上全自动生化分析仪等缺点，而免疫分析法中的免疫扩散法、放射免疫分析法、荧光标记免疫分析法、酶标记免疫分析法、化学发光免疫分析法也存在诸多不足之处，如需要特殊的设备，样品需要预处理，不能上全自动生化分析仪进行批量检测分析等。临床上常用的免疫透射比浊法因其样本用量少，可直接在全自动生化分析仪上进行批量样本分析、操作简单受到欢迎，但目前建立的方法及试剂都存在一些或不足，主要表现在：一是抗体效价不高，都在1:16以下，特异性、亲合力、亲和力不高，二是校准血清是以人血清为基质，虽然乙肝表面抗原阴性、HIV检测阴性、丙氨酸氨基转移酶正常的人血清，但这也很难排除没有其他传染病的可能，给操作者带来很大的危险性，而且为冻干品，煤皮带定值不一，使用前需用水复溶，操作及其不便，而且不同的复溶者复溶后瓶间差异大，复溶后必须冰冻保存，特别是不能反复解冻使用，不但造成试剂浪费，而且质量也得不到保证，测定结果差异大，其稳定性也不好；三是对高脂、黄疸、溶血样本抗干扰能力差。四是采用单点校准液，不符合曲线回归方程计算，导致出现高值偏低，低值偏高的现象，所测结果不准确。五是抗血清在短时间内出现沉淀，使上机操作困难，影响检测效果。

另外检测apoA I、apoB所需的抗apoA I、apoB抗体的制备过程中，抗原的提取方式直接关系到抗体（抗血清）质量的好坏。已知的方法是采用倍比稀释的密度梯度超离心技术收集到apoA I、apoB量极高的HDL和LDL，然后再采用双脱脂法去除脂肪和剩余的杂蛋白，即可得到电泳纯的apoA I、apoB抗原，然后进行免疫。上述方法的缺点是超离心所用的时间较长，而且其脱脂和超离的过程中往往使蛋白发生了变性和改变了蛋白空间结构，改变了蛋白的免疫原性，从而免疫所得抗血清效价不高。采用双扩散免疫电泳，apoA I效价大于1:32，apoB效价大于1:256的几率非常的小。

一篇中国授权公告号为CN101135687B的专利，公开了一种测定血清中的apoA I、apoB的试剂盒。目的是提供的检测试剂盒应具有样本无需稀释、操作简单、准确度高、重复性好、抗干扰能力强，基质稳定的特点。提供的技术方案是：其双试剂剂型包括：a、反应剂，主要包括缓冲液、高分子加速剂；b、抗体试剂，主要包括抗apoA I 抗血清、抗apoB抗血清和抗血清稀释液；c、液体血清型恒定值校准液，主要包括缓冲液、apoA I抗原、apoB抗原。该方案中的稳定剂采用高浓度的动物血清来做稳定剂，但其保护效果并不理想，并且保存一段时间后便会失效，因此有待改进。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种用于检测apoA I、apoB的试剂盒，其具有操作简单、准确度高、保存时间长的优点。