[发明专利]一株猪流行性腹泻病毒毒株及其在制备猪流行性腹泻疫苗中的应用

说明书

本发明提供了一株猪流行性腹泻病毒毒株PEDV CH/HNPJ/2017，属于病毒疫苗技术领域，所述病毒毒株PEDV CH/HNPJ/2017保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.16216。本发明提供了包括所述病毒毒株基因组的重组载体以及所述重组载体的构建方法。本发明所述病毒毒株位于G2b亚群，与中国疫苗经典毒株CV777分属于不同的群，与AJ1102和CHGD‑01毒株亲缘关系较近，亲缘关系更接近2010年后爆发的猪流行性腹泻疫情中分离获得的猪流行性腹泻病毒毒株，与现有流行毒株存在的基因型差异较小，可应用于制备猪流行性腹泻疫苗，免疫效果好。

技术领域

本发明属于病毒疫苗技术领域，尤其涉及一株猪流行性腹泻病毒毒株及其在制备猪流行性腹泻疫苗中的应用。

背景技术

猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrheavirus,PEDV)引起的一种以腹泻、呕吐、脱水和对哺乳仔猪高致死率为主要特征的急性、高度接触性的猪肠道传染病。PEDV可以感染各年龄段的猪，但哺乳仔猪更易感染，其死亡率和发病率接近100％。1971年该病首次在英国被发现，随后蔓延至欧洲及亚洲部分国家。2013年美国首次报道了PEDV感染，而后该病迅速蔓延至全美，造成了严重经济损失，从而使得PEDV受到世界各国的关注。我国2010年就曾爆发过严重的PED疫情。近年来，PED的流行更是越来越广泛，新的变异株不断出现，商品化疫苗与流行毒株的抗原性不匹配，免疫效果不佳，从而严重影响着我国养猪业的健康发展。目前市售猪流行性腹泻疫苗几乎全部使用的是经典毒株，与流行毒株存在基因型差异，进而导致疫苗免疫效果较差。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一株新的、有效候选疫苗猪流行性腹泻病毒毒株及其在制备猪流行性腹泻疫苗中的应用。

为了实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一株猪流行性腹泻病毒毒株PEDV CH/HNPJ/2017，所述病毒毒株PEDV CH/HNPJ/2017保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCCNo.16216。

本发明还提供了一种包括上述病毒毒株基因组的重组载体。

本发明提供了所述重组载体的构建方法，包括以下步骤：

1)从上述的病毒毒株中提取获得RNA；

2)反转录所述RNA获得cDNA，

3)扩增所述cDNA获得PEDV全基因组DNA；

4)将所述PEDV全基因组DNA与载体连接获得重组载体。

优选的，步骤2)中所述反转录的温度为40～44℃，所述反转录的时间为55～65min。

优选的，步骤2)中所述反转录的体系包括以下组分：

所述反转录引物的浓度为10μM，所述反转录引物为PEDV-21438R，具体的核苷酸序列为TACCATGCACCAAAGTGGAATCAT。

优选的，步骤3)中扩增所述cDNA的体系包括以下组分：

所述正向引物和反向引物的浓度为为10μM。

优选的，步骤3)中扩增所述cDNA的程序包括：