[发明专利]基于EBFC的自供能细菌生物传感器及其应用

权利要求书

1.一种利用基于EBFC的自供能细菌生物传感器检测食物中致病菌的方法，所述基于EBFC的自供能细菌生物传感器包括阳极、PB电极、阴极和电解液；所述阳极为MCH/aptamer/GDH/PTH/CNT/AuNPs/CP生物阳极，所述阴极为BOD/CNTs/CP生物阴极，所述电解液为含1～3mM NAD⁺/NADH、3～6mM葡萄糖，pH 6.0的0.1M PB缓冲体系；

所述MCH/aptamer/GDH/PTH/CNT/AuNPs/CP生物阳极的制备方法包括如下步骤：

对修饰有CNT/AuNPs的CP电极表面进行循环伏安扫描聚合上硫堇，电极用含有GDH溶液和适配体SH-DNA的混合物涂覆，一次孵育，获得aptamer/GDH/PTH/CNT/AuNPs/CP；二次水冲洗电极表面，向电极表面滴加MCH溶液，二次孵育，进行封板，二次水冲洗电极表面，得到MCH/aptamer/GDH/PTH/CNT/AuNPs/CP生物阳极；

所述检测食物中致病菌的方法包括如下步骤：

步骤(1)：将MCH/aptamer/GDH/PTH/CNT/AuNPs/CP生物阳极、PB电极、含1～3mM NAD⁺/NADH、3～6mM葡萄糖，pH 6.0的0.1M PB缓冲体系组装为电池，测量电池的E₁^OCV，E₁^OCV为生物阳极与PB电极之间的开路电压，记为E₁₀^OCV；将BOD/CNT/CP生物阴极、PW电极、含1～3mM NAD⁺/NADH、3～6mM葡萄糖pH 6.0的0.1M PB缓冲体系组装为电池，测量电池的E₂^OCV，E₂^OCV为PW电极与生物阴极之间的开路电压，记为E₂₀^OCV；

步骤(2)：将MCH/aptamer/GDH/PTH/CNT/AuNPs/CP生物阳极置于0.5～2mL不同浓度的致病菌，在37℃孵育60～120分钟，得到pathogens/MCH/aptamer/GDH/PTH/CNT/AuNPs/CP生物阳极，二次水冲洗电极表面；

步骤(3)：pathogens/MCH/aptamer/GDH/PTH/CNT/AuNPs/CP生物阳极、PB电极、含1～3mM NAD⁺/NADH、3～6mM葡萄糖，pH 6.0的0.1M PB缓冲体系组装为电池，测量电池的E₁^OCV，记为E_1n^OCV；将BOD/CNT/CP生物阴极、PW电极、含pH 6.0的0.1M PB缓冲体系组装为电池，测量电池的E₂^OCV，记为E_2n^OCV，观察PB电极的颜色变化。

2.根据权利要求1所述的一种利用基于EBFC的自供能细菌生物传感器检测食物中致病菌的方法，其特征在于，所述GDH和适配体浓度分别为1～4mg mL^-1和400～700nM，混合物滴涂量为25～60μL。

3.根据权利要求1所述的一种利用基于EBFC的自供能细菌生物传感器检测食物中致病菌的方法，其特征在于，所述对电极表面进行循环伏安扫描聚合硫堇的扫速为30-70mv s^-1，所述硫堇溶于2.2mM乙酸溶液中，使硫堇浓度为1～3mM。

4.根据权利要求1所述的一种利用基于EBFC的自供能细菌生物传感器检测食物中致病菌的方法，其特征在于，MCH溶液为20～50μL、1～3mM的MCH溶液。

5.根据权利要求1所述的一种利用基于EBFC的自供能细菌生物传感器检测食物中致病菌的方法，其特征在于，所述一次孵育的条件为3～7℃孵育8～16h。

6.根据权利要求1所述的一种利用基于EBFC的自供能细菌生物传感器检测食物中致病菌的方法，其特征在于，所述二次孵育的条件为室温孵育0.5～2h。