[发明专利]梅毒螺旋体心磷脂抗体定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

梅毒螺旋体心磷脂抗体定量检测试剂盒及其制备方法，涉及梅毒螺旋体。梅毒螺旋体心磷脂抗体定量检测试剂盒设有心磷脂抗原包被微孔板、辣根过氧化物酶标记的抗人Ig单克隆抗体、显色液A、显色液B、浓缩洗涤液、反应终止液、校准品和外包装盒。1)提取梅毒螺旋体外膜；2)提取梅毒螺旋体心磷脂抗原；3)制备心磷脂抗原包被微孔板；4)制备抗人Ig单克隆抗体；5)标记抗人Ig单克隆抗体的辣根过氧化物酶；6)提供校准品；7)提供显色液A；8)提供显色液B；9)制备浓缩洗涤液；10)制备反应终止液；11)制备梅毒螺旋体心磷脂抗体定量检测试剂盒。采用梅毒螺旋体来源的心磷脂抗原，实现梅毒螺旋体心磷脂抗体定量检测。

技术领域

本发明涉及梅毒螺旋体，尤其是涉及可获得梅毒螺旋体来源的心磷脂抗原，采用定量检测方法的梅毒螺旋体心磷脂抗体定量检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

梅毒是由梅毒螺旋体引起的性传播性疾病，近年来在国内的发病率逐年上升，梅毒的防控已列为我国公共卫生服务的主要任务之一。

梅毒螺旋体尚不能在体外培养，而直接病原学，如暗视野显微镜检查和镀银染色阳性率不高。血清学实验是梅毒临床诊断和疗效监测的主要方法，实验包括非特异性抗体和特异性抗体检测，非特异性抗体(也称心磷脂抗体)主要包括性病研究试验室玻片实验(VDRL)、不加热血清反应素试验(USR)、快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)和甲苯胺红不加热试验(TRUST)等。其原理基本相同，均采用牛的心磷脂为抗原，与卵磷脂和胆固醇按照一定的比例进行混合，组成抗原颗粒，当抗原颗粒与梅毒心磷脂抗体反应后出现凝集现象(童曼莉,刘莉莉,林丽蓉,张惠林，杨天赐.梅毒实验诊断程序研究进展[J].中华检验医学杂志,2017,40(11))。临床通常将样本进行倍比稀释进行梅毒心磷脂抗体的滴度检测，以监测梅毒的治疗效果。但不能进行定量检测，无法判断患者梅毒心磷脂抗体的消长规律，不能提供疾病的治疗效果和预后的客观指标。

发明内容

本发明的目的在于提供可获得梅毒螺旋体来源的心磷脂抗原，定量分析梅毒螺旋体心磷脂抗体，实现梅毒螺旋体心磷脂抗体定量检测，可作为梅毒治疗效果和预后客观指标的梅毒螺旋体心磷脂抗体定量检测试剂盒及其制备方法。

所述梅毒螺旋体心磷脂抗体定量检测试剂盒设有心磷脂抗原包被微孔板、辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗人Ig单克隆抗体、显色液A、显色液B、浓缩洗涤液、反应终止液、校准品和外包装盒；所述辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗人Ig单克隆抗体、显色液A、显色液B、浓缩洗涤液、反应终止液和校准品均装在相应的聚乙烯瓶中并与心磷脂抗原包被微孔板一起装在外包装盒内。

所述梅毒螺旋体心磷脂抗体定量检测试剂盒的制备方法包括以下步骤：

1)提取梅毒螺旋体外膜；

在步骤1)中，所述提取梅毒螺旋体外膜的具体方法可为：用超声裂解器充分裂解梅毒螺旋体，8000r/min 4℃离心20min除去大的细菌碎片，100 000g 4℃离心2h获得梅毒螺旋体外膜。

2)提取梅毒螺旋体心磷脂抗原；

在步骤2)中，所述提取梅毒螺旋体心磷脂抗原的具体方法可为：取梅毒螺旋体外膜4mg，加入1mL氯仿和0.5mL甲醇，充分振荡，并于37℃水浴20min，再加入1.5mL甲醇，振荡，500g离心5min，留取上清，向上清液中加入3mL氯仿，然后加入1.2mL溶液Ⅰ，500g离心5min，溶液Ⅰ分为2层，用吸管吸走上层溶液，然后沿管壁加入1.2mL溶液Ⅱ，小心旋转，待分层后再将上层相吸走，重复2次，在微弱氮气流下将溶剂挥发，获得梅毒螺旋体心磷脂抗原；所述溶液Ⅰ的组成可为1.80mmol/L CaCl₂、1.79mmol/L MgCl₂和49.57mmol/L NaCl的水溶液；所述溶液Ⅱ的组成可为氯仿、甲醇和水，所述氯仿、甲醇和水的体积比可为3︰48︰47。

3)制备心磷脂抗原包被微孔板；