[发明专利]一种洋葱不育系愈伤组织诱导的方法

说明书

本发明公开了一种洋葱不育系愈伤组织诱导的方法，该方法步骤如下：a、取具有鳞茎盘的不育洋葱球；b、去除叶片与根、去除膜质鳞片和2‑3层肉质鳞片后消毒；c、继续去除肉质鳞片至不育洋葱球的直径为3‑3.5cm，依次采用75%酒精和次氯酸钠消毒处理并分别用无菌水冲洗；d、无菌条件下，切除与消毒液接触的鳞茎盘；e、无菌条件下，沿鳞茎盘横切面平切，并横、竖划线竖切获得多个小块鳞茎盘；f、将切出的小块鳞茎盘作为外植体放置在诱导愈伤组织的培养基上；g、重复步骤（e）、（f），直至横切面平切至鳞片与鳞茎盘接口处；h、避光培养且培养温度为（25±2）℃。本发明可有效降低污染率，提高愈伤组织的诱导率高，重复性好。

技术领域

本发明涉及洋葱组织培养技术领域，具体地说是一种易操作、诱导效果好的洋葱不育系愈伤组织诱导的方法。

背景技术

洋葱（Allium cepa L.）是世界上主要蔬菜种类之一，也是我国主要的栽培和出口品种。洋葱属于典型的2年生异花授粉作物，育种上存在周期长、效率低、自交退化严重等特点；而洋葱杂交优势特别明显，但不同品种洋葱在自然状态下杂交率很低，利用雄性不育系进行杂交育种可提高育种效率，因此，不育系的选育是洋葱杂交育种的基础。

植物组织培养和植株再生体系的建立是基因工程育种的重要工作，通过组织培养建立高效植株再生体系主要有两种主要途径：器官发生途径和体细胞胚胎发生途径。其中器官发生分为直接器官发生和间接器官发生, 植物的间接器官发生与体细胞胚胎发生都需要愈伤组织为材料。但是，我国洋葱的离体培养过程中存在很多问题，特别是愈伤组织诱导率和愈伤增繁低的问题，而利用不育系鳞茎盘进行离体培养的研究更少。利用组织培养技术可以提高洋葱育种效率，缩短育种年限，同时还可获得更多的优良性状，有效解决一些洋葱育种上的问题，是一种有效的育种新途径。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术存在的缺陷，提供一种易操作、诱导效果好的洋葱不育系愈伤组织诱导的方法。

本发明的目的是通过以下技术方案解决的：

一种洋葱不育系愈伤组织诱导的方法，其特征在于：该方法步骤如下：

a、取具有鳞茎盘的不育洋葱球；

b、去除叶片与根、去除膜质鳞片和2-3层肉质鳞片后，消毒处理；

c、继续去除肉质鳞片至不育洋葱球的直径为3-3.5cm，采用75%酒精一次消毒后采用无菌水冲洗，再用次氯酸钠二次消毒后采用无菌水冲洗；

d、无菌条件下，握住肉质鳞片将不育洋葱球倒置且不接触鳞茎盘，将步骤（c）的消毒过程中与消毒液接触的鳞茎盘切除；

e、无菌条件下，以1.5-2mm的高度间隔，用手术刀沿鳞茎盘横切面平切，并在鳞茎盘上以4-5mm间距横、竖划线竖切到横切面平切口处，获得多个小块鳞茎盘；

f、将切出的小块鳞茎盘作为外植体放置在诱导愈伤组织的培养基上，外植体的上下朝向不变；

g、重复步骤（e）和步骤（f），直至横切面平切至鳞片与鳞茎盘接口处；

h、避光培养且诱导愈伤组织的培养温度为（25±2）℃。

所述步骤（b）中的消毒处理时间为50-60min。

所述步骤（b）中的消毒处理采用浓度为10-20ppm的臭氧。

所述步骤（c）中的继续去除肉质鳞片至不育洋葱球的直径为3-3.5cm的过程中，如出现分球则不再去除鳞片。

所述步骤（c）中的75%酒精一次消毒时间为30-40s，并采用无菌水至少冲洗1次。

所述步骤（c）中的二次消毒采用10%次氯酸钠消毒10-15min，无菌水冲洗4-5次。