[发明专利]一种快速检测遗传性皮肤抗氧化基因的方法

权利要求书

1.一种快速检测遗传性皮肤抗氧化基因的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)设计5对特异性引物，并确定各引物对的扩增条件；

2)制备5组含三种不同基因型的标准品；

3)将待检测样品总DNA的浓度稀释至20ng/μL作为模板；

4)使用上述步骤中的引物及模板，借助HRM技术对各基因片段进行特异性扩增并测定其溶解曲线；

5)根据4)中的实验结果，依据与标准品的线型关系判断样品的基因型。

2.如专利要求1所述的5对引物，其特征为下表所示：

3.如权利要求1所述的5组标准品制备，其特征在于：

1)通过PCR扩增筛选得到野生型及突变型基因(若突变型基因不易筛选可进行化学合成法)；

2)将筛选所得的基因(野生型及突变型)连接到克隆常用质粒中，将连接后质粒进行转化扩增，最后回收连接成功的质粒(并将相应菌落进行菌种保存)；

3)将连接有两种基因型的质粒进行定量稀释处理，同时取两种不同质粒1∶1混合即可得到突变杂合型模板。将这三种质粒进行定量处理，并取其中一部分稀释为工作浓度在后续实验中作为标准品DNA使用。

4.如专利要求1所述的特异性扩增体系与条件，其特质如下：

扩增体系：

序号	试剂	体积(μl)
1	①2×Master Mix	10
2	2(25mM)]]>	2.4
3	Primer 16F	0.4
4	Primer 16R	0.4
5	2O]]>	4.8

扩增条件：

5.如权利要求1中所述根据试验结果判断样品的基因型，其特征在于：使用LightCycler 480 software软件对样品的突变位点进行溶解曲线进行线型分析，与三种标准品进行对比分析样品的基因型。同时，扩增后的样本仍可进行测序分析以验证实验结果的真实性。