[发明专利]一种固液相结合制备齐考诺肽的方法

说明书

本发明公开了一种固液相结合制备齐考诺肽的方法，主要解决现有合成方法存在的合成周期长，生产成本高，产品收率低不利于后期工业化放大的技术问题。本发明包括如下步骤：（1）固液相结合制备带修饰的多肽片段A；（2）固相法制备多肽片段B；（3）通过自然链接法，在液相条件下将修饰的多肽片段A链接到多肽片段B上，制备得到齐考诺肽线性肽粗品溶液；（4）在同一体系下加入氧化剂，氧化得到齐考诺肽粗品水溶液，再经高效液相色谱纯化冻干得到齐考诺肽精品。

技术领域

本发明涉及多肽化合物合成技术领域，尤其涉及一种固液相结合制备齐考诺肽的方法。

背景技术

齐考诺肽英文名称Ziconotide，是一种含有3个二硫键和25个氨基酸的多肽。分子式：C₁₀₂H₁₇₂N₃₆O₃₂S₇，分子量：2639.13，序列和结构如式I所示

式1

齐考诺肽是一种非阿片类镇痛药物，适用于鞘内注射并且对其他治疗(如全身镇痛药、辅助治疗或鞘内注射吗啡)不能耐受或无效的严重慢性疼痛患者。齐考诺肽为含有3个二硫键和25个氨基酸的多肽。本品与位于脊髓背角浅层的初级伤害性传入神经上的N-型钙通道结合，抑制初级传人神经末梢兴奋性递质的释放，具有抗伤害感受作用。本品不与阿片受体结合，其药理作用也不被阿片受体拮抗剂所阻断。在动物模型中，本品可改变阿片引起的胃肠动力降低，但不能改善吗啡引起的呼吸抑制。给大鼠鞘内注射本品，同时给予吗啡、巴氯芬或可乐定，镇痛作用增强。本品与吗啡合用，不能防止大鼠对吗啡的耐受性。

现有的齐考诺肽的制备方法合成周期长，生产成本高，产品收率低，不利于齐考诺肽的大规模生产。CN200710301598，CN201110139661，CN201610947996公开了三种不同的合成齐考诺肽的方法，都是逐一偶联25个不同保护的氨基酸，随着肽链的延伸，偶联难度的增加，会导致多肽粗品纯度降低，纯化困难，收率降低的问题。CN201310202089和CN20150421787公开了一种全保护片段合成齐考诺肽的方法，其中CN201310202089选择了3个两肽片段来避免残肽的产生，CN20150421787则选择了全保护片段B（12-18）、C（6-11）、D（1-5）逐一偶联到片段A（19-25）树脂上，此类片段合成法都需要过量的全保护片段，而且制备大量片段也会造成成本提高，不利于后期工业化放大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种固液相结合制备齐考诺肽的方法，主要解决现有合成方法存在的合成周期长，生产成本高，产品收率低不利于后期工业化放大的技术问题。

为实现以上目的，本发明提供以下技术方案：一种固液相结合制备齐考诺肽的方法，包括如下步骤：

1.固液相结合制备带修饰的多肽片段A：{Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Sbzl}；

2.固相法制备多肽片段B：{Cys-Cys-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-Lys-Cys-NH₂}；

3.通过自然链接法,在液相条件下将修饰的多肽片段A 链接到多肽片段B上，制备得到齐考诺肽线性肽粗品溶液，即Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-Cys-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-Lys-Cys-NH₂；

4.在同一体系下加入氧化剂，氧化得到齐考诺肽粗品水溶液，再经高效液相色谱纯化冻干得到齐考诺肽精品。