[发明专利]高效准确超灵敏检测乳腺细胞癌变的检测方法

权利要求书

1.一种高效准确超灵敏检测乳腺细胞癌变的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤1，选择人乳腺上皮细胞株（MCF10A）、人乳腺癌细胞株（MCF7）、HER2过表达的MCF7细胞株（MCF7/HER2）作为试验用细胞株，并对试验用细胞株进行消化吹打处理形成细胞悬液；

步骤2，用血球计数板测定细胞悬液中的细胞密度，以细胞密度为1×10⁴个细胞/cm²接种到细胞浴槽的盖玻片上用于细胞附着；

步骤3，细胞分别附着24h、24.5h、25h、25.5h后，用PBS缓冲液冲洗粘附在盖玻片上的细胞3次，在37℃ 用染料DCFH-DA染色细胞30分钟，孵育后，将染色的细胞用PBS缓冲液冲洗三次后向细胞浴槽中加入100μl的PBS缓冲液；

步骤4，将细胞浴槽放入纳米光电生化检测仪，调整纳米探头与细胞的相对位置，检测过程中添加刺激物PMA并同时记录细胞内DCF的荧光光子数响应。

2.根据权利要求1所述的高效准确超灵敏检测乳腺细胞癌变的检测方法，其特征在于：步骤1中，先将试验用细胞株用PBS缓冲液清洗，清洗后用0.25%的胰蛋白酶溶液消化细胞，细胞消化后用含血清的培养基终止消化，将混悬液吸到离心管中，1000r/min离心5min，得到的沉淀物用含血清的培养基重悬吹匀即可。

3.根据权利要求1所述的高效准确超灵敏检测乳腺细胞癌变的检测方法，其特征在于：步骤2中，所述细胞浴槽的盖玻片为细胞可爬壁生长的盖玻片。

4.根据权利要求1所述的高效准确超灵敏检测乳腺细胞癌变的检测方法，其特征在于：步骤3中，所述染料DCFH-DA的浓度分别为20μM、25μM、30μM、 35μM。

5.根据权利要求1所述的高效准确超灵敏检测乳腺细胞癌变的检测方法，其特征在于：步骤3中，所述染料DCFH-DA的激发波长为485nm，发射波长为530nm。

6.根据权利要求1所述的高效准确超灵敏检测乳腺细胞癌变的检测方法，其特征在于：步骤4中，所述纳米探头是尖端通光，尖端尺寸在100nm左右的镀膜纳米探头。

7.根据权利要求1所述的高效准确超灵敏检测乳腺细胞癌变的检测方法，其特征在于：步骤4中，所述纳米探头通过微操作系统进行控制移动。

8.根据权利要求1所述的高效准确超灵敏检测乳腺细胞癌变的检测方法，其特征在于：步骤4中，所述纳米探头与细胞的相对位置通过倒置荧光生物显微镜进行观察调整。

9.根据权利要求1所述的高效准确超灵敏检测乳腺细胞癌变的检测方法，其特征在于：步骤4中，所述检测荧光光子响应过程中添加刺激物PMA的浓度分别为10μM、 15μM, 20μM、25μM。