[发明专利]一种Msyb融合标签的大肠杆菌可溶性蛋白表达载体、构建方法及应用

说明书

本发明属于蛋白工程技术领域，尤其是涉及一种Msyb融合标签的大肠杆菌可溶性蛋白表达载体、构建方法及应用。本发明所提供的Msyb融合标签的大肠杆菌可溶性蛋白表达载体的构建方法所制备得到的Msyb融合标签的大肠杆菌可溶性蛋白表达载体可以较好地提高目的蛋白表达量及提高目的蛋白的可溶性，目的蛋白可溶性表达将为蛋白分离纯化、蛋白活性研究奠定基础，在基因工程、蛋白质工程等生物学领域中将存在广泛的应用。

技术领域

本发明属于蛋白工程技术领域，尤其是涉及一种Msyb融合标签的大肠杆菌可溶性蛋白表达 载体、构建方法及应用。

背景技术

大肠杆菌具有遗传性状了解透彻、生长快、培养经济、表达水平高、待选质粒多等特点，在 基因工程技术领域成为首选的表达系统，也是基因表达技术中发展最早和目前应用最广泛的表达 系统。但是由于各种原因，大肠杆菌表达系统也有自身局限性，当所表达的蛋白是复杂的真核来 源的蛋白时，大肠杆菌往往不能将翻译出的多肽链正确折叠而不能形成具有天然构象蛋白质，而 是形成不溶性的无功能的包涵体。包涵体中的多肽链折叠错误，必须通过复杂的变性与复性过程 才能形成有活性的蛋白，但成功率低。探索重组蛋白在大肠杆菌中可溶性表达具有较高的学术价 值与广泛的应用前景。

目前已经找到了一些提高重组蛋白在大肠杆菌中可溶性表达的方法，如改造工程菌、优化诱 导表达条件(诱导温度、诱导时间、诱导剂浓度等)、分子伴侣共表达、添加融合标签等。其中 较常用的办法是使用融合表达策略，即将融合标签和靶蛋白连接成为一个融合蛋白进行表达，融 合标签的使用即可促进与之相连的靶蛋白可溶性表达，还便于目的蛋白的纯化。根据融合标签的 功能可分为两类：一类是促进蛋白可溶性表达的标签，如麦芽糖结合蛋白(MBP)、硫氧还蛋 白(Trx)、小分子泛素样修饰蛋白(SUMO)、二硫键形成蛋白A(DsbA)、谷胱甘肽转移酶 (GST)等；另一类是纯化(检测)标签，如多聚精氨酸标签(Arg-tag)、多聚组氨酸标签(His-tag)、 c-myc-tag、S-tag、链霉素亲和结合标签、FLAG等。但由于蛋白质种类繁多，目前还没有找到可 以提高蛋白可溶性表达的通用型融合标签。

MsyB是大肠杆菌中的一种酸性蛋白，过去被认为具有抑制蛋白外运功能缺失突变的作用， 最近研究证明MsyB还是一种非常有效的蛋白可溶性标签，其显著的特征包括有助于重组蛋白高 可效溶性表达，分子量相对较小(124个氨基酸)，是大肠杆菌内源蛋白等，这些特征为它在生 物技术领域的应用开辟了十分广阔的前景。

发明内容

本发明的第一个目的在于，针对现有技术中存在的不足，提供一种Msyb融合标签的大肠杆 菌可溶性蛋白表达载体。

为此，本发明的上述目的通过以下技术方案来实现：

一种Msyb融合标签的大肠杆菌可溶性蛋白表达载体，所述Msyb融合标签的大肠杆菌可溶 性蛋白表达载体命名为BL21-pHis-Msyb，且保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物 中心(北京)，保藏编号为：CGMCC No.16044。

本发明的第二个目的在于，针对现有技术中存在的不足，提供一种Msyb融合标签的大肠杆 菌可溶性蛋白表达载体的构建方法。

为此，本发明的上述目的通过以下技术方案来实现：

一种Msyb融合标签的大肠杆菌可溶性蛋白表达载体的构建方法，所述Msyb融合标签的大 肠杆菌可溶性蛋白表达载体的构建方法包括如下步骤：以大肠杆菌BL2(DE3)基因组为模板，以 SQE ID NO.2、SQE ID NO.3为引物进行PCR扩增，得到基因序列为SQE IDNO.1的Msyb基因 片段；将pET20进行双酶切，并通过柔和连接子连接双酶切后的pET20和Msyb基因片段，得 到连接产物；将连接产物热激转化DH5α感受态细胞并筛选重组克隆，得到Msyb融合标签的大 肠杆菌可溶性蛋白表达载体；

上述基因序列分别为：