[发明专利]一种蓝果忍冬中提取矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法

说明书

一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素‑3‑葡萄糖苷的方法，是一种花青素提取、分离及纯化的技术手段。以富含高纯度矢车菊素‑3‑葡萄糖苷的蓝果忍冬这一新兴材料作为材料，利用溶剂萃取法进行提取，SPE固相萃取技术进行分离，高效液相色谱法(HPLC)进行鉴定，可快速、高效、低成本的获得高纯度的矢车菊素‑3‑葡萄糖苷，解决目前由于自然界中花青素种类繁多，分离高纯度的单体难度较大这一难题，具有广泛的应用价值及市场前景。

技术领域

本发明属于花青素提取领域技术，主要涉及一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法。

背景技术

蓝果忍冬(Lonicera caerulea L.)是一种多年生灌木属的忍冬科，原产于北半球，主要分布于俄罗斯，日本，中国，北美和北欧国家。古时，蓝果忍冬的果实已被中国，日本等国家用作药用。成熟果实呈椭圆形，深蓝色至紫色。果实中含有丰富的生物活性物质，如维生素C，花青素，酚酸和黄类黄酮等。尤其是其花青素含量，平均可达1,300mg CE/100gFW，比蓝莓、树莓、黑加仑、草莓的花青素含量高出数倍，是一种优质的花青素提取材料。其中，矢车菊素-3-葡萄糖苷单体高达90％以上，是目前自然界含矢车菊素-3-葡萄糖苷纯度最高的植物。

花青素是植物组织中常见的黄酮类化合物，是一种重要的水溶性色素，与果实的颜色和品质有着密切的关系。花青素具有很强的抗氧化性，可清除人体自由基，缓解衰老。同时，具有预防神经元疾病，心血管疾病，抗癌症，抗糖尿病，抗炎等功效，对人类的健康有诸多益处。近年来，人工合成着色剂一直存在安全性的争议，花青素作为一种天然色素，具有无毒害，可替代人工合成色素的特点，因此，具有很强的开发利用潜能。

花青素的提取、分离纯化是进来研究领域较为活跃的一个方面，常见的提取方法有溶剂提取、超声波辅助提取、微波辅助提取、超高压辅助提取等。常见的分离方法有纸层析、薄层层析、柱层析等。由于自然界中花青素的种类广发，分离高纯度的单体难度较大，而以含有高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的蓝果忍冬作为材料，结合甲醇溶剂提取法，SPE固相萃取技术进行分离，纯化及通过高效液相色谱(HPLC)进行鉴定，即可快速高效的获得高纯度的矢车菊素-3-葡萄糖苷。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术的不足，提供一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法，达到快速分离花青素的效果，实现制备高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的目的。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

1、一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法，该方法包括以下步骤：

(1)将新鲜的蓝果忍冬果实在-20℃冷冻，冻干并研磨成粉末；

(2)用甲醇作为萃取剂，以合适的料液比进行提取，使用摇床振荡，离心，取上清液；

(3)残渣用一定体积的甲醇在相同的条件下再次萃取，合并上清液，并在40℃下旋蒸浓缩，获得粗提液；

(4)将浓缩液通过SPE装置进行纯化。将C18Sep-Pak柱依次用乙酸乙酯，甲醇和0.01MHCl预处理；

(5)添加粗提液至C18柱上，用0.01M HCl洗脱糖，用乙酸乙酯洗脱吸附的非花色素苷多酚，然后用酸性甲醇(0.1％HCl的甲醇溶液，v/v)洗脱吸附的花青素，直至洗脱液变为无色，收集花青素；

(6)将收集得到的花青素在40℃下旋蒸并过滤膜；

(7)利用HPLC测定经过SPE纯化后的花青素提取物，发现可获得高纯度的矢车菊素-3-葡萄糖苷。