[发明专利]一种从土壤中筛选嗜酸耐重金属固氮菌的方法

说明书

本发明公开了一种从土壤中筛选嗜酸耐重金属固氮菌的方法，将酸性土壤与水混合进行振荡培养，并进行离心分离，弃去上清液，再加入无菌酸性培养液振荡培养，得到菌株混合液；取该菌株混合液作为接种菌。向所述接种菌中加入无菌酸性培养液，进行振荡培养，得到菌株培养液；取该菌株培养液作为接种菌，再以该接种菌重新执行该振荡培养，直至执行6次该振荡培养；吸取第四次、第五次和第六次该振荡培养得到的菌株培养液，并加入到固氮培养基中进行平板涂布培养和斜面培养菌，再进行菌株分离纯化，即得到纯化的嗜酸耐重金属固氮菌。本发明能够快速高效地筛选出适合酸性土壤的嗜酸耐重金属固氮菌，而且能够大幅提高菌株培养获得率和菌株的嗜酸耐重金属能力。

技术领域

本发明涉及环境微生物技术领域，尤其涉及一种从土壤中筛选嗜酸耐重金属固氮菌的 方法。

背景技术

长期大量施用化肥会造成土壤酸化，而土壤酸化会促进土壤中有害重金属的溶解释 放，从而会促进作物对重金属的吸收累积，加剧重金属对人体的危害。

目前，利用生物学技术来改善酸化土壤的质量(例如：采用嗜酸耐重金属的生物菌株 改善酸化土壤的质量)是研究的热点方向。土壤微生物具有较强的恢复性，能够用于恢复 酸化土壤中微生物的多样性，改善土壤微生物群落结构，改良土壤功能，因此获得良好的 且能够适应于酸化土壤的菌株十分必要。但是，现有技术中嗜酸耐重金属菌株筛选方法的 筛选效率低、嗜酸耐重金属能力较差，难以满足酸性土壤治理需求。

发明内容

针对现有技术中的上述不足之处，本发明提供了一种从土壤中筛选嗜酸耐重金属固氮 菌的方法，能够快速高效地筛选出适合酸性土壤的嗜酸耐重金属固氮菌，而且能够大幅提 高菌株培养获得率和菌株的嗜酸耐重金属能力，为治理受酸化影响且重金属含量高的土壤 提供了良好的生物菌株资源。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种从土壤中筛选嗜酸耐重金属固氮菌的方法，包括以下步骤：

步骤A、将酸性土壤与水混合，进行振荡培养，然后进行离心分离，弃去上清液，从而得到含混合菌株的沉淀物；

步骤B、向所述含混合菌株的沉淀物中加入无菌酸性培养液，进行振荡培养，从而得 到菌株混合液；取该菌株混合液作为接种菌；

步骤C、将所述接种菌中与无菌酸性培养液混合，进行振荡培养，从而得到菌株培养 液；取该菌株培养液作为接种菌，再以该接种菌重新执行步骤C，直至执行6次步骤C的振荡培养；

步骤D、吸取第四次、第五次和第六次步骤C的振荡培养所得到的菌株培养液，并加入到固氮培养基中进行平板涂布培养，从而得到平板培养菌；

步骤E、从承载所述平板培养菌的培养皿中，选取菌落数多于50的培养皿，并在固氮 培养基中进行斜面培养，从而得到斜面培养菌；

步骤F、对所述斜面培养菌进行菌株分离，得到嗜酸耐重金属固氮菌；

步骤G、将所述嗜酸耐重金属固氮菌在固氮培养基中进行培养、纯化，从而得到纯化 的活性嗜酸耐重金属固氮菌。