[发明专利]一种体外模拟胃肠淀粉消化的方法在审
| 申请号： | 201811081819.X | 申请日： | 2018-09-17 |
| 公开（公告）号： | CN109251959A | 公开（公告）日： | 2019-01-22 |
| 发明（设计）人： | 张妍;霍俊伟;谢佳璇;朱冠冰;秦栋;刘佩 | 申请（专利权）人： | 东北农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/40 | 分类号： | C12Q1/40;C12Q1/37;G01N21/31;C12P19/14;C12P19/00 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 150030 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 消化 模拟胃肠 种体 淀粉 淀粉酶 体外模拟消化 血糖生成指数 磷酸缓冲液 参考依据 技术手段 临床试验 模拟小肠 食品研究 体外模拟 胃肠消化 胃蛋白酶 小麦面条 低成本 高通量 还原糖 碳酸钾 透析袋 吸光度 胰腺 条块 稀释 主食 面条 筛选 衡量 应用 | ||
1.一种体外模拟胃肠淀粉消化的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1))配置1L磷酸缓冲液(1M)，用CaCl2进行10倍稀释，加入HCl/NaOH，将pH调节至6.9；
(2)使用迷你搅拌器将生小麦面条搅拌成小面块，称重一定量的面条块并加入一定体积的磷酸缓冲液；
(3)将小面块煮沸并冷却至室温，用1.0M HCl将浆液的pH调节至1.5，并加入一定量的胃蛋白酶引发消化；
(4)将消化液在37℃水浴振荡器中振荡一定时间，消化结束后，向浆液中加入碳酸钾(1.0M)，将pH调节至6.9使胃蛋白酶失活，然后将浆液转移至SnakeskinTM透析袋，截留分子量为7kDa；
(5)向浆液中加入胰腺α-淀粉酶来模拟小肠消化，将透析袋的两端密封并置于100mL磷酸缓冲液中，在37℃水浴振荡器振荡一定时间；
(6)以不同的时间间隔取出等分试样的透析液，并立即用相同量的新鲜缓冲液进行替换；
(7)在96孔板中加入一定比例的无酚DNSA试剂和取出的透析液并密封，在100℃下加热一定时间以产生红棕色，然后再冰水浴中冷却至室温；
(8)将100μL混合物溶液转移到新的96孔板中，在540nm下测量吸光度以衡量透析液中还原糖的含量。
2.根据权利要求1所述的体外模拟胃肠淀粉消化的方法，其特征在于，步骤(1)所述的加入缓冲液的CaCl2含量为35-40ppm。
3.根据权利要求1所述的体外模拟胃肠淀粉消化的方法，其特征在于，步骤(2)所述的面条块的重量为0.4-0.6g，磷酸缓冲液的体积为4-6mL。
4.根据权利要求1所述的体外模拟胃肠淀粉消化的方法，其特征在于，步骤(3)所述的加入胃蛋白的含量为3-4mg，3200U/mg。
5.根据权利要求1所述的体外模拟胃肠淀粉消化的方法，其特征在于，步骤(4)所述的振荡的条件：转速为100-200rpm，振荡时间为1-2h。
6.根据权利要求1所述的体外模拟胃肠淀粉消化的方法，其特征在于，步骤(5)所述的胰腺α-淀粉酶的含量为65-70mg，16U/mg，振荡的转速为100-200rpm，振荡时间为2-4h。
7.根据权利要求1所述的体外模拟胃肠淀粉消化的方法，其特征在于，步骤(6)所述的时间间隔为0-200min，等分试样的透析液体积为250-400μL。
8.根据权利要求1所述的体外模拟胃肠淀粉消化的方法，其特征在于，步骤(7)所述的无酚DNSA试剂与透析液的比例为1：1-2，加热时间为4-8min。
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