[发明专利]一种在体修复用细胞移植的支架材料的制备方法

说明书

本发明公开了一种在体修复用细胞移植的支架材料的制备方法，包括以下步骤：采用纤维蛋白原溶解液溶解冻干纤维蛋白原得到纤维蛋白原溶液，浓度30～100mg/ml；采用凝血酶溶解液溶解凝冻干血酶，得到凝血酶的细胞混悬液，浓度200～800IU/ml，将1ml浓度为10⁵～10⁷/ml的种子细胞的细胞培养液与0.01～0.5ml的凝血酶混悬液混匀，得到含有凝血酶的种子细胞混悬液；采用双路注射器将1～2ml纤维蛋白原溶液和含有凝血酶的种子细胞混悬液，等体积均匀注射入损伤部位，使凝胶形状与损伤缺口相契合。本发明，能固定种子细胞，促进种子细胞的生长发育增殖；医生在清创空间内可自由塑形；在种子细胞完成与病变部位的融合修复后完全降解，安全可靠；适用于软骨细胞或者干细胞的移植。

技术领域

本发明涉及种子细胞移植技术领域，具体涉及一种在体修复用细胞移植的支架材料的制备方法。

背景技术

目前临床上进行种子细胞移植修复手术所采用的细胞固定方式主要包括生物胶原膜固定或者壳聚糖水凝胶等细胞支架材料固定。处于实验室研究过程中的细胞支架材料品种繁多，目前主要的天然生物支架材料有胶原、壳聚糖、明胶、丝素蛋白等。

但是这些材料存在各种各样的问题：例如，部分支架材料具有诱导种子细胞的去分化作用；降解过快或过慢,从而影响细胞的迁移和修复效果；有的支架材料需要体外先进行塑形，然后再吸附细胞进行移植，操作过程复杂，临床应用过程中的可能性差。

有鉴于此，急需对现有的支架进行改进，以方便操作，延长降解时间，提高修复效果。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是现有的种子细胞支架材料操作不便，降解时间短，修复效果差的问题。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是提供一种在体修复用细胞移植的支架材料的制备方法，包括以下步骤：

采用纤维蛋白原溶解液溶解冻干纤维蛋白原,得到纤维蛋白原溶液，所述纤维蛋白原溶液浓度为30～100mg/ml；

采用凝血酶溶解液溶解冻干凝血酶，得到凝血酶混悬液，所述凝血酶混悬液的浓度为200～800IU/ml；

将1ml浓度为10⁵～10⁷/ml的种子细胞的细胞培养液与0.01～0.5ml的凝血酶混悬液混匀，得到含有凝血酶的种子细胞混悬液；

采用双路注射器将1～2ml纤维蛋白原溶液和含有凝血酶的种子细胞混悬液，等体积均匀注射入损伤部位，在损伤部位凝固后形成在体修复用细胞移植的支架材料，在双路注射器向损伤部位注射期间，按照损伤区域的形状进行塑形和修补，使凝胶形状与损伤缺口相契合。

在另一个优选的实施例中，纤维蛋白原溶解液采用浓度为0.9％的氯化钠。

在另一个优选的实施例中，凝血酶溶解液采用浓度为1～3mg/ml的氯化钙。

在另一个优选的实施例中，所述种子细胞包括但不限于：软骨细胞、干细胞。

在另一个优选的实施例中，纤维蛋白原溶液和含有凝血酶的种子细胞混悬液注射入损伤部位后2～5min内凝固。

在另一个优选的实施例中，注射凝固后，形成孔径为100～200μm的纤维蛋白胶孔径。

与现有技术相比，利用纤维蛋白原溶液和含有凝血酶的种子细胞混悬液形成纤维蛋白凝胶，并采用纤维蛋白凝胶作为种子细胞的支架结构，不仅能很好地固定种子细胞，给种子细胞提供良好的生长空间，方便营养成分渗入，还能促进种子细胞的生长发育增殖；在手术操作的过程中，操作简便，医生可在清创空间内自由塑形；并能够在种子细胞完成与病变部位的融合修复后完全降解，安全可靠；特别适合临床上医生对于损伤部位进行清创后，通过种子细胞的移植进行再生修复，特别适用于软骨细胞或者干细胞的移植。

附图说明