[发明专利]基于场流分离技术检测马铃薯抗性淀粉含量及结构的方法

权利要求书

1.一种基于场流分离技术检测马铃薯抗性淀粉含量及结构的方法，其特征是，包括如下步骤：

a、水解马铃薯非抗性淀粉；

a-1、称取适量马铃薯淀粉于样品瓶中，向其中加入醋酸钠缓冲液，之后于37℃水浴中预热；

a-2、向样品瓶中加入α-胰淀粉酶和淀粉葡糖苷酶的混合酶；

a-3、连续搅拌，并在37℃水浴中孵育；

a-4、将样品瓶从37℃水浴转至90℃水浴中，静置，灭活消化酶；

a-5、将样品瓶从90℃水浴中取出，自然冷却至室温；

b、溶解马铃薯抗性淀粉；

b-1、取步骤a-5中样品于样品瓶中，加入NaOH溶液，70℃水浴，磁力搅拌，溶解抗性淀粉；

b-2、加入非对称场流分离所用载液，非对称场流分离所用载液为NaNO₃和NaN₃的水溶液，70℃水浴，磁力搅拌；

b-3、加入HCl溶液，70℃水浴，继续磁力搅拌；

b-4、将样品瓶从水浴中取出，自然冷却至室温；

c、采用场分离技术测定马铃薯抗性淀粉；

采用非对称场流分离联用多角度激光光散射检测器和示差折光检测器，对步骤b-4所得样品进行分析，得到抗性淀粉的dRI峰面积M1以及旋转半径和分子量分布；

d、检测马铃薯抗性淀粉含量；

d-1、称取适量马铃薯淀粉于样品瓶中，加入NaOH溶液，70℃水浴，磁力搅拌；

d-2、加入非对称场流分离所用载液，非对称场流分离所用载液为NaNO₃和NaN₃的水溶液，70℃水浴，磁力搅拌；

d-3、加入HCl溶液，70℃水浴，继续磁力搅拌；

d-4、将样品瓶从水浴中取出，自然冷却至室温；

d-5、采用非对称场流分离联用多角度激光光散射检测器和示差折光检测器，对步骤d-4所得样品进行分析，得到马铃薯淀粉的dRI峰面积M2；

d-6、依据如下公式计算马铃薯抗性淀粉含量：

马铃薯抗性淀粉含量= M1/M2 × 100%。

2.根据权利要求1所述的基于场流分离技术检测马铃薯抗性淀粉含量及结构的方法，其特征是，步骤c和步骤d-5中采用非对称场流分离联用多角度激光光散射检测器和示差折光检测器对样品进行分析时，检测器流速为1 mL/min；洗脱流速是指数衰减交叉流流速，19min内由1.4 mL/min降至0.05 mL/min，半衰期为4 min。

3.根据权利要求1所述的基于场流分离技术检测马铃薯抗性淀粉含量及结构的方法，其特征是，非对称场流分离所用载液为NaNO₃和NaN₃的水溶液，且NaNO₃为50 mM，NaN₃为3mM，载液的pH 为7.00。

4.根据权利要求1所述的基于场流分离技术检测马铃薯抗性淀粉含量及结构的方法，其特征是，步骤a-3中搅拌的速度为160 rpm，且在37℃水浴中孵育2 h。

5.根据权利要求1所述的基于场流分离技术检测马铃薯抗性淀粉含量及结构的方法，其特征是，步骤b-1、步骤b-2、步骤b-3、步骤d-1、步骤d-2、步骤d-3中的磁力搅拌速度均为400 rpm。

6.根据权利要求1所述的基于场流分离技术检测马铃薯抗性淀粉含量及结构的方法，其特征是，步骤a-1中醋酸钠缓冲液的pH为 5.2，且醋酸钠缓冲液中包含1 mM CaCl₂。