[发明专利]一种枸橼酸盐化合物的新用途

说明书

本发明提供了一种枸橼酸盐化合物的新用途，所述枸橼酸盐化合物是利用建立稳定表达TFEB‑GFP的HeLa细胞筛选体系对小分子化合物库进行筛选所发现的一种小分子化合物，该小分子化合物为选择性雌激素受体调节剂N,N‑二乙基‑2‑[4‑(1,2‑二苯基‑2‑氯乙烯基)苯氧基]乙胺顺反异构体混合物的枸橼酸盐，能有效的促进转录因子TFEB核转位。

技术领域

本发明涉及一种化合物的新用途，尤其是一种枸橼酸盐化合物的新用途。

背景技术

转录因子EB(Transcription Factor EB，TFEB)是第一个鉴定出的MiTF/TFE家族的一种基本螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链(basic-helix-loop-helix leucine zipper，bHLH-Zip)类转录因子，在溶酶体的生物合成和代谢过程中起着重要的调控作用，是细胞自噬重要的调控因子，具有广泛的生理功能。

TFEB的细胞定位和活性调节与其磷酸化修饰状态相关，在营养丰富的条件下，TFEB主要以无活性状态存在于细胞质，但在饥饿或溶酶体功能障碍的条件下，TFEB迅速转位至细胞核并激活其靶基因的转录。TFEB蛋白至少可以在20个位点被磷酸化，其中的Ser142和Ser211这两个丝氨酸残基对其细胞定位具有关键作用。当这两个丝氨酸残基都被磷酸化时，TFEB定位在细胞质中且无活性，如果将这两个氨基酸突变为Ala，那么突变TFEB则总是定位在核里并具有相应的活性。在正常营养条件下，TFEB的Ser211以mTORC1依赖性方式磷酸化，促进TFEB与YWHA(14-3-3)蛋白结合并保留在细胞质中，抑制mTORC1将导致TFEB/YWHA复合体的解离，TFEB迅速转位至核内，提高与自噬和溶酶体功能有关的多个基因的转录。还有研究表明，TFEB的Ser211位点去磷酸化后依然具有调控作用，不足以将TFEB定位到细胞核中，Ser122才是mTOR直接磷酸化的位点，其磷酸化在很大程度上阻断了mTORC1抑制对TFEB的作用。mTORC1协调地对Ser211和Ser122的磷酸化进行调节，当mTORC1被抑制后，用不能磷酸化的残基同时取代两个位置而不是其中任一个位置，才能使TFEB核定位占优势，而且Ser122的去磷酸化对于TFEB的核定位是必需的。

研究表明，在HeLa细胞中TFEB过表达能够诱导许多溶酶体相关基因的转录激活，并导致溶酶体数量显著增加。TFEB还靶向编码质子泵亚基的基因，产生并维持溶酶体水解酶水解反应所需的酸性环境，从而对溶酶体降解途径进行调节。此外，TFEB与许多自噬基因的启动子区结合，诱导自噬体的生物合成和自噬体与溶酶体的融合。过表达TFEB增强了与自噬相关的51个基因的表达水平，而沉默TFEB则会下调它们的表达。TFEB对自噬途径的多个关键步骤进行调控，且对自噬的激活具有直接调控作用。

研究表明，TFEB通过调控细胞自噬或溶酶体的生物合成参与细胞内物质清除，它可以做为靶点用于治疗与自噬或溶酶体功能障碍有关的疾病，如溶酶体贮积症(LSDs)、神经退行性疾病(帕金森氏病、亨廷顿舞蹈病、阿尔茨海默氏病)及肿瘤(肾癌、胰管腺癌)等。因此，以TFEB为靶点筛选促进其活性的小分子化合物对上述疾病治疗具有很好的临床应用前景。已有一些促进TFEB表达的化合物用于临床试验，如2-羟丙基-β-环糊精(HPβCD)和染料木黄酮。但到目前为止，发现的具有诱导TFEB发挥作用的小分子化合物数量较少，且特异性较差。因此，需要研究开发更多TFEB特异性激活剂，并研究其激活TFEB的分子机制及对细胞自噬、细胞生长的影响，对指导临床TEFB靶点药物研发具有重要意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种枸橼酸盐化合物的新用途。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

枸橼酸盐化合物促进TFEB入核方面的应用，所述化合物可促进TFEB核转位及其靶基因表达，所述枸橼酸盐化合物为N,N-二乙基-2-[4-(1,2-二苯基-2-氯乙烯基)苯氧基]乙胺顺反异构体混合物的枸橼酸盐，具有式(I)所示结构：