[发明专利]一种生产米黑根毛霉脂肪酶mRML酶粉的方法有效
| 申请号： | 201811092251.1 | 申请日： | 2018-09-19 |
| 公开（公告）号： | CN110923215B | 公开（公告）日： | 2021-08-10 |
| 发明（设计）人： | 黄金金;赵庆伊;陈凌霄;卜伟;叶梦奇;郑维发 | 申请（专利权）人： | 江苏师范大学 |
| 主分类号： | C12N9/20 | 分类号： | C12N9/20;C12R1/84 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 周敏 |
| 地址： | 221000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 生产 根毛 脂肪酶 mrml 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种生产米黑根毛霉脂肪酶mRML酶粉的方法，其特征在于，包括步骤：
S1：构建含脂肪酶基因mrml的能够表达mRML的工程菌株；所述脂肪酶基因mrml的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述工程菌株为巴斯德毕赤酵母；
S2：培养工程菌株；
S3：经诱导表达获得含米黑根毛霉脂肪酶mRML的发酵液，所述诱导条件为每24小时补充一次诱导物甲醇，至甲醇终浓度为1.0％v/v；
S4：将发酵液于4℃，5000rpm条件下离心10min，之后取发酵液上清40体积份置于容器中，调节pH至7.0，将容器放置在-20℃的环境内，直至容器内的液体表面出现结冰；
S5：向容器中加入8体积份-20℃预冷的丙酮，边加边缓慢搅拌，之后-20℃静置10min，再向容器中缓慢加入72体积份-20℃预冷的丙酮，边加边缓慢搅拌，之后-20℃静置2-3h，于8000rpm、4℃条件下离心10min，弃上清，收集沉淀；
S6：向步骤S5得到的沉淀中加入2倍沉淀物体积的预冷丙酮，搅拌混匀，于8000rpm、4℃条件下离心10min；重复操作一次；
S7：风干沉淀，得米黑根毛霉脂肪酶mRML酶粉。
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