[发明专利]含有微生物菌剂的泥鳅用饲料的制备方法

权利要求书

1.含有微生物菌剂的泥鳅用饲料的制备方法，其特征在于：将蛋白液、玉米粉、鱼粉、秸秆粉复配成饲料；将饲料、微生物菌液和水搅拌混合，加入（Z）-3-己烯醇和4-羟基苯乙醇，将混合物置于发酵槽中好氧发酵，即得含有微生物菌剂的饲料。

2.根据权利要求1所述的含有微生物菌剂的泥鳅用饲料的制备方法，其特征在于：所述蛋白液制备步骤为：

1）将废弃鱼鳞洗净，烘干，粉碎，用1-2％柠檬酸溶液浸泡24-36小时，间歇搅拌，浸泡完成后用去离子水冲洗至中性，过滤；然后用0.03-0.05％氢氧化钠溶液浸泡24-36小时，间歇搅拌，浸泡完成后用去离子水冲洗至中性，过滤；

2）将预处理鱼鳞置于0.05-0.08mol/L柠檬酸溶液体系中，加入底物重量0.3-0.5％的木瓜蛋白酶限制性酶解，控制温度在5-10℃，超声辅助酶解，持续低速搅拌下酶解24-48小时，沸水浴灭酶，将酶解液高速离心，取上清液，沉淀重复酶解操作2-3次，收集上清液；

3）上清液中加入质量百分比2.7-3.5％的枯草杆菌蛋白酶，调节pH为7.5-8.0，45-55℃恒温下超声辅助酶解，水解1.5-2小时后沸水浴灭酶，冷却得酶解液；

4）将酶解液依次通过大孔吸附树脂-阳离子交换树脂-阴离子交换树脂进行吸附，吸附后用洗脱液进行洗脱，然后收集提纯液减压浓缩，得蛋白液。

3.根据权利要求2所述的含有微生物菌剂的泥鳅用饲料的制备方法，其特征在于：所述超声辅助酶解超声频率为50-60kHz，超声声强为0.4-0.5W/cm²。

4.根据权利要求2所述的含有微生物菌剂的泥鳅用饲料的制备方法，其特征在于：所述洗脱液为室温下去离子水，流速为2-3BV/h。

5.根据权利要求1所述的含有微生物菌剂的泥鳅用饲料的制备方法，其特征在于：所述微生物菌液制备步骤为：将哈茨木霉、黑曲霉和李氏木霉分别置于马铃薯糖琼脂培养基上进行斜面培养；将得到经斜面培养后的哈茨木霉、黑曲霉和李氏木霉接种于培养基进行扩繁，哈茨木霉、黑曲霉和李氏木霉种子瓶菌液按照体积比2:1-3∶2-4，以5-7％接种量接种发酵瓶混合培养得混合发酵菌液，并加入保护剂。

6.根据权利要求5所述的含有微生物菌剂的泥鳅用饲料的制备方法，其特征在于：所述保护剂为按照质量百分比脱脂乳8-10％、黄原胶5-6％、海藻糖2-4％、山梨醇0.6-1.2%和茶多酚0.001-0.003%。

7.根据权利要求1所述的含有微生物菌剂的泥鳅用饲料的制备方法，其特征在于：所述蛋白液、玉米粉、鱼粉、秸秆粉按3-4:1.5-2.0:1.0-2.0:1的重量比复配成饲料；饲料、微生物菌液和水按重量比100-200:1-3:100-200混合。

8.根据权利要求1所述的含有微生物菌剂的泥鳅用饲料的制备方法，其特征在于：所述微生物菌液为稀释成20-40%的菌液。

9.根据权利要求1所述的含有微生物菌剂的泥鳅用饲料的制备方法，其特征在于：所述（Z）-3-己烯醇和4-羟基苯乙醇的加入量为微生物菌剂固形物重量的0.001-0.003%和0.002-0.003%。

10.根据权利要求1所述的含有微生物菌剂的泥鳅用饲料的制备方法，其特征在于：所述饲料制备过程中发酵温度为38-40℃，发酵20-24小时。