[发明专利]一种用于检测玉米赤霉烯酮的定性定量免疫层析试纸条及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及食品安全检测技术领域，特别涉及一种用于检测玉米赤霉烯酮的定性定量免疫层析试纸条及其制备方法和应用。该定性定量免疫层析试纸条，在底板上依次搭接设置有滤纸、样品垫、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水纸；玻璃纤维膜上附着有胶体金标记的玉米赤霉烯酮单克隆抗体；硝酸纤维素膜上设置有检测线和质控线，检测线上包被有荧光微球标记的玉米赤霉烯酮人工抗原，质控线上包被有第二抗体。本发明双显色体系对检测样本中的玉米赤霉烯酮同时实现定性和定量检测，样本结果在检测中得到双体系验证，结果更加可靠，节约检测时间。

技术领域

本发明涉及食品安全检测技术领域，特别涉及一种用于检测玉米赤霉烯酮的定性定量免疫层析试纸条及其制备方法和应用。

背景技术

玉米赤霉烯酮(Zearalenone，简称ZEN)由镰刀菌属产生的一种激素类真菌毒素。玉米赤霉烯酮有多种结构类似的衍生物，主要包括α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮等，这些物质可由玉米赤霉烯酮在动植物体内代谢转化而成，也可由镰刀菌产生，它们同样具有雌激素效应且常见于粮食及动植物组织中，可引起各种谷物病变，主要发生在玉米、高粱、燕麦、小麦、大麦及谷子等农作物中。研究表明，玉米赤霉烯酮及其代谢物具有类雌激素作用，能导致动物雌激素水平过高及严重的生殖和不育问题。玉米赤霉烯酮污染饲料和食品后，不仅使农业经济受到严重影响，而且还会带来严重的食品安全问题，威胁到人类的健康。

鉴于玉米赤霉烯酮的危害严重，我国规定对于谷物及其制品，小麦、小麦粉中玉米赤霉烯酮的限量标准为60μg/kg，玉米、玉米面(渣、片)为60μg/kg。

现行的食品安全国家标准食品中玉米赤霉烯酮测定的第一法为液相色谱法，适用于粮食和粮食制品，酒类，酱油、醋、酱及酱制品，大豆、油菜籽、食用植物油中玉米赤霉烯酮的测定。第二法为荧光光度法，适用于大豆、油菜籽、食用植物油中玉米赤霉烯酮的测定。第三法为固相萃取柱净化液相色谱-质谱法，适用于牛肉、猪肉、牛肝、牛奶、鸡蛋中玉米赤霉烯酮的测定。除此之外，还有一些常用的检测方法，例如免疫法、薄层色谱法、气相色谱-质谱法等。

免疫层析技术是出现于80年代初期的一种独特的免疫分析方式，它通常以条状纤维层析材料为固相，通过毛细作用使样品溶液在层析条上泳动，通过抗原抗体结合的免疫反应原理，层析过程中免疫复合物被富集或截留在层析材料的一定区域(检测线)，通过酶反应或直接运用可目测的标记物(如胶体金)而得到直观的实验结果(如检测线出现不同颜色的条带)；而游离标记物则越过检测线，达到与结合标记物自动分离之目的。免疫层析技术常见的目测标记载体有胶体金、乳胶、胶体硒等，其中运用最成功的标记物为胶体金。但是，胶体金免疫层析试纸条存在以下缺陷：

⑴一般试纸条均为通过肉眼观察结果进行定性分析，无法实现精准的定量检测。

⑵不同的材料基质效应明显，样本背景干扰较大，易产生假阳性结果。

⑶检测的阳性结果无法保存，通常超过判断时间后，结果不再准确可靠。

市场为了满足对样本进行定量检测的需求，各种基于不同标记物的定量检测试纸条也层出不穷，一般的定量检测试纸条，都是单一的标记物标记抗体后，通过小型仪器读取显色信号值，再通过绘制标准曲线进行定量检测。目前基于不同元素标记物的荧光免疫层析方法也已经出现，并获得高灵敏度，但是该定量检测方法也存在以下缺陷：

⑴实际检测中，阴性结果所占比率很高，但该方法所有试纸条均需要用仪器读取，否则不能得到结果，在做大批量样本检测时，耗时较长。

⑵定量检测中，检测部门仍然需要一个阈值来区分阴性和阳性，所以数据处理量较大。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种用于检测玉米赤霉烯酮的定性定量免疫层析试纸条及其制备方法和应用。该定性定量免疫层析试纸条灵敏度高、检测时间短、操作简便，并能同时实现定性和定量检测检测样本中玉米赤霉烯酮。