[发明专利]马流感病毒H3N8亚型的融合蛋白及其制备方法、应用和疫苗有效
| 申请号： | 201811095817.6 | 申请日： | 2018-09-19 |
| 公开（公告）号： | CN109180820B | 公开（公告）日： | 2021-06-25 |
| 发明（设计）人： | 贺笋;任立松;李延涛;陈泽良 | 申请（专利权）人： | 天康生物制药有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/85;C07K16/10;G01N33/569;A61K39/145;A61P31/16 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 李强 |
| 地址： | 830000 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市新疆*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 流感病毒 h3n8 融合 蛋白 及其 制备 方法 应用 疫苗 | ||
1.一种马流感病毒H3N8亚型的融合蛋白，其特征在于，包括HA区段和NA区段；所述HA区段由SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列表达，所述NA区段由SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列表达；
HA区段和NA区段的排列顺序为HA-NA，通过Linker连接；
所述Linker的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO.4所示。
3.一种权利要求1或2所述的融合蛋白的制备方法，其特征在于，将所述融合蛋白的基因在宿主中表达。
4.一种权利要求3所述的融合蛋白的制备方法，其特征在于，使用哺乳动物表达系统表达所述融合蛋白的基因。
5.一种权利要求3所述的融合蛋白的制备方法，其特征在于，使用CHO细胞表达系统表达所述融合蛋白的基因。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，提供包含表达所述融合蛋白的基因的表达载体，将所述表达载体导入CHO细胞中，然后对CHO细胞进行加压筛选，再将加压筛选出的CHO细胞驯化成悬浮培养的细胞株，使所述悬浮培养的细胞株表达所述融合蛋白。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，使用谷氨酰胺合成酶筛选扩增系统筛选表达所述融合蛋白的CHO细胞株。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述谷氨酰胺合成酶筛选扩增系统中使用的表达载体为pcDNA3、pEE6.4或pEE12.4。
9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，采用逐渐驯化的方法传代至少6代获得悬浮培养的表达所述融合蛋白的CHO细胞株。
10.权利要求1或2所述的融合蛋白或权利要求3-9中任一项所述的制备方法制备得到的蛋白的应用，其特征在于，包括如下（a）-（d）中的至少一种：
（a）制备马流感病毒疫苗；
（b）制备马流感病毒的抗体；
（c）制备检测马流感病毒抗体的试剂盒；
（d）制备马流感病毒诊断抗原。
11.一种包含权利要求1或2所述的融合蛋白的马禽流感H3N8亚型的疫苗。
12.根据权利要求11所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗中所述融合蛋白的浓度为20-100μg/ml。
13.根据权利要求12所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗中所述融合蛋白的浓度为30-80μg/ml。
14.根据权利要求13所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗中所述融合蛋白的浓度为50μg/ml。
15.根据权利要求11所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗还包括辅料，所述辅料包括疫苗佐剂、稳定剂和抗生素中的一种或多种。
16.根据权利要求15所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗佐剂包括氢氧化铝胶、弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂、白油佐剂、MF59佐剂或ISA201VG。
17.根据权利要求16所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗佐剂使用ISA201VG。
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