[发明专利]腐败梭菌α毒素突变体、表达其的基因、制备方法和腐败梭菌疫苗

权利要求书

1.一种腐败梭菌α毒素突变体，其特征在于，为如下（a1）-（a2）中的任意一种：

（a1）将如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的腐败梭菌α毒素第86位氨基酸残基由半胱氨酸突变为亮氨酸，和第189位氨基酸残基由丝氨酸突变为半胱氨酸得到的蛋白质；

（a2）切除（a1）的信号肽得到的蛋白质。

2.一种腐败梭菌α毒素突变体，其特征在于，所述腐败梭菌α毒素突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.编码权利要求1或2所述腐败梭菌α毒素突变体的基因。

4.根据权利要求3所述的编码腐败梭菌α毒素突变体的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

5.一种权利要求1或2所述的腐败梭菌α毒素突变体的制备方法，其特征在于，包括：将编码所述腐败梭菌α毒素突变体的基因在宿主细胞中表达。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，包括：使用哺乳动物表达系统表达编码所述腐败梭菌α毒素突变体的基因。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，使用CHO细胞表达系统表达所述腐败梭菌α毒素突变体的基因。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述CHO细胞为CHO-S细胞系。

9.根据权利要求5-8任一项所述的制备方法，其特征在于，将所述编码所述腐败梭菌α毒素突变体的基因克隆至表达载体，然后导入宿主细胞，再筛选和培养表达所述腐败梭菌α毒素突变体的宿主细胞，将宿主细胞表达的蛋白经纯化后得到所述腐败梭菌α毒素突变体。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述表达载体为pcDNA3。

11.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述表达载体为pcDNA^TM3.3-TOPO^R。

12.权利要求1或2所述的腐败梭菌α毒素突变体、权利要求3或4所述的基因、权利要求5-11中任一项所述的腐败梭菌α毒素突变体的制备方法或所述制备方法制备得到的腐败梭菌α毒素突变体在如下（x1）-（x4）中任意一项的应用：

（x1）制备腐败梭菌疫苗；

（x2）制备腐败梭菌α毒素抗体；

（x3）制备检测腐败梭菌α毒素的试剂和/或试剂盒；

（x4）制备检测腐败梭菌α毒素抗体的试剂和/或试剂盒。

13.一种腐败梭菌疫苗，其特征在于，包含权利要求1或2所述的腐败梭菌α毒素突变体或权利要求3或4所述的基因。

14.根据权利要求13所述的腐败梭菌疫苗，其特征在于，所述腐败梭菌疫苗包括腐败梭菌α毒素突变体；所述腐败梭菌α毒素突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述腐败梭菌α毒素突变体由哺乳动物表达系统表达得到。

15.根据权利要求14所述的腐败梭菌疫苗，其特征在于，所述腐败梭菌疫苗中腐败梭菌α毒素突变体的浓度为30-50μg/mL。

16.根据权利要求15所述的腐败梭菌疫苗，其特征在于，所述腐败梭菌疫苗中腐败梭菌α毒素突变体的浓度为35-45μg/mL。

17.根据权利要求16所述的腐败梭菌疫苗，其特征在于，所述腐败梭菌疫苗中腐败梭菌α毒素突变体的浓度为40μg/mL。