[发明专利]一株施氏假单胞杆菌及其应用

说明书

本发明公开了一株施氏假单胞杆菌及其应用，涉及生物防治植物病害领域。所述菌株为施氏假单胞杆菌(pseudomonas stutzeri)YT2003，保藏编号为CGMCC No.14674。本发明还公开了一种包括所述的施氏假单胞杆菌菌株YT2003的生物防治制剂及其制备方法。本发明的施氏假单胞杆菌菌株具有生长速度快、作用谱广、抗逆性强，在植物根际能够快速大量定殖等特点，因此具有良好的应用前景。由该施氏假单胞杆菌菌株制备的生物防治制剂，可以作为生物农药或生物肥料，防治多种土传植物细菌性病害，包括西瓜枯萎病等。

技术领域

本发明涉及生物防治植物病害领域，具体涉及一株施氏假单胞杆菌及其应用。

背景技术

植物病害严重影响农林作物生长，甚至引起作物死亡，造成重大的经济损失。对于植物病害的防治，常规采用的方法包括传统的化学防治、培育抗病品种以及生物防治。抗病品种周期长，抗性单一。化学防治使用药剂时间长、使用量大，造成农药残留，环境污染；同时，化学农药的长期使用，使得病原菌对其产生抗药性，导致防效下降甚至失败。利用有益微生物防治植物病害具有广阔的前景。

假单胞杆菌是植物病害生防微生物的重要组成部分，可用于防治多种植物病害。假单胞杆菌作为生防菌防治植物病害的机制主要有：抗生作用、营养竞争、空间竞争、重寄生作用以及诱导植物产生抗性等机制，假单胞杆菌的生防机制主要是以产生拮抗物质抑制有害病菌的生长或杀死病原菌。这些物质绝大多数为肽类抗生素，具有高效、低残留、与环境友好等优点。

发明内容

针对现有技术不足，本发明提供一株施氏假单胞杆菌及其应用，本发明的菌株具有生长速度快、产孢量大、作用谱广、抗逆性强，在植物根际能够快速大量定殖等特点，因此具有良好的应用前景。

为实现以上目的，本发明的技术方案通过以下技术方案予以实现：

本发明所提供的菌株为施氏假单胞杆菌(pseudomonas stutzeri)YT2003，是从土壤中分离获得的，已于2017年9月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏编号为CGMCC No.14674。其具有以下生物学特性：在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基或LB培养基上菌落形态为圆形或不规则形，乳白偏黄色，表面粗糙起褶皱，在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，28℃下培养两天后，镜检，菌体细胞呈杆状，能运动。经革兰氏染色呈阳性(以大肠杆菌为对照)。

优选的，所述施氏假单胞杆菌(pseudomonas stutzeri)YT2003及其制备的生物防治剂可用于防治西瓜枯萎病及其他镰刀菌引起的病害。

优选的，所述施氏假单胞杆菌(pseudomonas stutzeri)菌株YT2003的培养方法或繁殖方法包括以下步骤：

(1)普通培养保存采用LB培养基，配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，琼脂15-20g，蒸馏水1000mL，pH调至7.0-7.2；

(2)实验室液体培养采用LB液体培养基，配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，蒸馏水1000mL，pH调至7.0-7.2；

(3)大量发酵培养配方(重量百分含量)：黄豆粉3.0％，玉米粉3.0％，轻质碳酸钙0.2％，氯化钠0.1％，其余为水，pH 7.3。

优选的，所述生物防治制剂的制备方法包括以下步骤：

(1)将施氏假单胞杆菌菌株YT2003移植到LB液体培养基中，28℃摇床振荡培养2～3d得到种子液；

(2)将步骤(1)制备的种子液按质量比3％的比例接种到大量发酵液体培养基中，28-30℃下振荡培养28-32h；