[发明专利]一种复苏即用型红细胞冷冻保护剂及使用方法

说明书

本发明涉及一种复苏即用型红细胞冷冻保护剂及使用方法，涉及细胞技术领域，本发明提供的红细胞冷冻保护剂成分包括0.25~0.3mol/L的海藻糖，5~7%（v/v）的二甲基亚砜，1~3%（v/v）的人血清白蛋白。本发明提供的红细胞冷冻保护剂成分简单，在冻存细胞时不需要严格控制红细胞和红细胞冷冻保护剂之间的混合速度，直接混合即可，冻存方法简便且耗时短。利用本发明冻存的红细胞，复苏后不需要洗涤即可使用，省去了甘油冻存法中繁琐耗时的洗涤步骤，满足了紧急用血者的需要。

技术领域

本发明属于细胞技术领域，具体涉及一种复苏即用型的红细胞冷冻保护剂及使用方法。

背景技术

目前大部分血液是在2~6℃中保存的，保存的天数在20天左右，不能满足长时间大量保存的需要，尤其是对一些稀有血型，如RH阴性血。由于人数较少，Rh阴性血常被称为“熊猫血”，因此一旦这些患者患病急需输血的情况下，那么血站的Rh阴性血存量就会备受考验。另外，一些无偿献出的血由于保存时间较短而白白浪费掉，而另一方面却是当发生重大灾害（像地震、战争）时需要大量的血液时却供给不足，因此，红细胞的长期保存有着重要的临床及战略意义。

深低温冻存是指将细胞和保护剂混合后，降温到-65℃以下，呈固态，长久低温保存。在深低温条件下，细胞内的酶活性均已停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。目前，红细胞深低温冻存最成熟的方案是采用甘油作为保护剂冻存。

甘油深低温冻存红细胞的操作工艺非常繁琐，冻存时需要非常缓慢的匀速混合红细胞和甘油，而解冻时也需要使用羟乙基淀粉和生理盐水为洗涤剂的洗涤4-5次。不仅操作过程繁琐，而且耗时长，不能满足急需用血患者的需要。

发明内容

本发明提供了一种复苏即用型红细胞冷冻保护剂及使用方法，使用该方法克服了上述储存时间短、冻存过程复杂，复苏时间长的问题。

一种复苏即用型红细胞冷冻保护剂，包括以下组分: 5 ~ 7%（v/v）的二甲基亚砜（DMSO），0.25~0.3mol/L的海藻糖，1~3%（v/v）的人血清白蛋白。

一种复苏即用型红细胞冷冻保护剂的使用方法，包括以下步骤：

（1）将海藻糖、人血清白蛋白、DMSO依次加入水溶液中，配制成红细胞冷冻保护剂，各组分含量分别为0.25 ~ 0.3 mol/L的海藻糖，5 ~ 7%（v/v）的DMSO，1~3%（v/v）的人血清白蛋白；

（2）新鲜已加抗凝剂的血液于4℃、2500 rpm条件下离心10min，去掉血浆得到浓缩红细胞，将浓缩红细胞与红细胞冷冻保护剂混合，室温放置30min后，置于梯度降温盒中，梯度降温至-80℃。

优选地，步骤（1）中所述的DMSO的含量为6%（v/v），海藻糖的浓度为2.8mol/L，人血清白蛋白的含量为2%（v/v）。

优选地，步骤（2）中所述的浓缩红细胞和红细胞冷冻保护剂的体积比为1:10。

优选地，步骤（2）中所述的梯度降温速率为1~2 ℃/min

在本发明中，冻存的红细胞复苏后即可使用。

有益效果

1.本发明提供的一种复苏即用型红细胞冷冻保护剂成份简单，在冻存红细胞时不需要严格控制红细胞和红细胞冷冻保护剂之间的混合速度，直接混合即可，冻存方法简便且耗时短。

2.利用本发明冻存的红细胞，复苏后不需要洗涤即可使用，省去了甘油冻存法中非常繁琐耗时的洗涤步骤，满足了紧急用血者的需要。

具体实施方式

下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。