[发明专利]一种猪丹毒疫苗增菌培养基

说明书

本发明提供一种猪丹毒疫苗增菌培养基，涉及生物学领域，由以下重量份的原料制成：蛋白胨5.0‑10.0g、酵母浸粉5.0‑10.0g、牛肉浸粉5.0‑10.0g、牛肝浸粉5.0‑10.0g、磷酸氢二钾3.0‑5.0g、磷酸二氢钠5.0‑8.0g、葡萄糖5.0‑10.0g、吐温‑800.5‑1.0g、明胶2.0‑5.0g，纯化水加至1000ml；猪丹毒疫苗增菌培养基制备方法：将用于制备猪丹毒疫苗培养基除葡萄糖外所有原料，加入到纯化水中，充分溶解后用氢氧化钠溶液调节PH值至7.8‑8.2，116℃灭菌30分钟，使用前，无菌操作加入终浓度50％的葡萄糖溶液12ml，混匀；所述50％葡萄糖溶液的配制：称取葡萄糖50g，加纯化水溶解，定容至100ml，116℃灭菌20分钟，2‑8℃保存。本发明涉及合成干粉培养基在猪丹毒疫苗生产中的应用，具有适合猪丹毒疫苗菌体高密度培养、选用商品化原料、培养菌菌数高的有益效果。

技术领域

本发明涉及生物学技术领域，具体是一种猪丹毒疫苗增菌培养基。

背景技术

猪丹毒是猪的三大传染病之一，呈世界性分布，也是一种人畜共患病，其病源是猪丹毒杆菌。目前我国现有的猪丹毒活疫苗，有单苗、二联苗和三联苗，它们对预防猪丹毒病起到了重要的作用。但在疫苗菌液培养方面与发达国家差距仍较大。首先，培养稳定性差。六七十年代，生产疫苗采用含2％-4％裂解全血的肉肝胃(膜)消化汤作为培养基，80年代后至今，国内兽用生物制品企业开始采用吐温-80替代裂解血球全血生产猪丹毒疫苗，使培养活菌数平均提高40％，虽然在培养工艺上摆脱了对动物血的依赖，但肉肝胃膜消化汤中主要成分肉、肝、胃浸液的质量受到动物的种类、年龄、新鲜及消化程度影响大，培养出的菌数低，批次间不稳定。

李红霞等(混合蛋白胨制成干粉培养基生产猪丹毒杆菌活疫苗的实验探讨，吉林畜牧兽医[J].2012年第7期，24-25)，指出使用混合国产、进口蛋白胨制备的培养基进行猪丹毒杆菌活疫苗的生产，优于使用单独国产蛋白胨的培养基，虽然提高了培养菌数，但存在培养成本高的问题；公告号为CN104306963A的专利申请，提供了用于猪丹毒杆菌培养的合成培养基，研究方向是延长猪丹毒活疫苗的保存时间，无法从申请文件中判断增菌效果。

发明内容

本发明提供一种猪丹毒疫苗增菌培养基，解决了现有技术中培养基合成成本高、培养菌数低、批次间不稳定的技术问题。

本发明是这样实现的：包括以下重量份的原料：蛋白胨5.0-10.0g、酵母浸粉5.0-10.0g、牛肉浸粉5.0-10.0g、牛肝浸粉5.0-10.0g、磷酸氢二钾3.0-5.0g、磷酸二氢钠5.0-8.0g、葡萄糖5.0-10.0g、吐温-800.5-1.0g、明胶2.0-5.0g，纯化水加至1000ml。

作为一种优选的实施方案，包括以下重量份的原料：蛋白胨10.0g、酵母浸粉10.0g、牛肉浸粉10.0g、牛肝浸粉10.0g、磷酸氢二钾4.0g、磷酸二氢钠10.0g、葡萄糖10.0g、吐温-801.0g、明胶5.0g，纯化水加至1000ml。

本发明还提供一种猪丹毒疫苗增菌培养基的制备方法，步骤如下：

将猪丹毒疫苗培养基除葡萄糖之外的原料：蛋白胨、酵母浸粉、牛肉浸粉、牛肝浸粉、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、吐温-80、明胶，加入到纯化水中，充分溶解后用氢氧化钠溶液调节PH值至7.8-8.2，116℃灭菌30分钟，使用前，无菌操作加入终浓度50％的葡萄糖溶液12ml，混匀；

所述50％葡萄糖溶液的配制：称取葡萄糖50g，加纯化水溶解，定容至100ml，116℃灭菌20分钟，2-8℃保存。