[发明专利]利用铜绿假单胞菌合成尿嘧啶的方法有效
| 申请号： | 201811103549.8 | 申请日： | 2018-09-20 |
| 公开（公告）号： | CN109207535B | 公开（公告）日： | 2021-06-25 |
| 发明（设计）人： | 杨西宁;邢善涛;李涛;王东琨;卓凯悦;柳芳 | 申请（专利权）人： | 新乡拓新药业股份有限公司;新乡制药股份有限公司 |
| 主分类号： | C12P17/12 | 分类号： | C12P17/12;C12N1/20;C12R1/385 |
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| 地址： | 453000 河南*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 铜绿 假单胞菌 合成 嘧啶 方法 | ||
1.利用铜绿假单胞菌合成尿嘧啶的方法，其特征在于：以胞嘧啶为原料，采用铜绿假单胞菌转化合成尿嘧啶；所述铜绿假单胞菌，其拉丁名为Pseudomonas aeruginosa，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.16110；合成尿嘧啶过程包括菌体制备、酶促反应和产品精制；酶促反应包括：将胞嘧啶50-600g/L、湿菌体量10-200g/L在纯化水体系中15-75℃反应后得到尿嘧啶。
2.根据权利要求1所述合成尿嘧啶的方法，其特征在于：菌体制备包括：第一阶段、菌体活化及产菌培养；第二阶段：菌体收集。
3.根据权利要求2所述合成尿嘧啶的方法，其特征在于：所述菌体活化及产菌培养操作为：菌种：Pseudomonas aeruginosa； 活化培养基：牛肉膏10g/L、蛋白胨10g/L、氯化钠5g/L、pH7.0；培养条件：35℃、200rpm、24h；产酶培养基：牛肉膏75g/L、氯化钠15g/L、豆粕水解液60mL/L、七水硫酸镁0.6g/L、一水硫酸锰0.4g/L、氯化钙0.6g/L、氯化锌0.05g/L、pH7.0；培养条件：38℃，DO≥50％，24h。
4.根据权利要求2所述合成尿嘧啶的方法，其特征在于：所述菌体收集为：将产酶培养液离心，然后湿菌体用pH 7.0、20mmol/L磷酸二氢钾缓冲液洗涤，离心所得湿菌体-20℃冷冻保存备用。
5.根据权利要求1所述合成尿嘧啶的方法，其特征在于：酶促反应包括：反应体系采用200rpm搅拌，水浴条件反应24-72h，降温结晶、板框或抽滤得尿嘧啶。
6.根据权利要求1所述合成尿嘧啶的方法，其特征在于：精制阶段为：将尿嘧啶溶于热水，然后过滤，将收集到的滤清液降温结晶，过滤干燥，得到尿嘧啶纯品。
7.根据权利要求6所述合成尿嘧啶的方法，其特征在于：过滤采用抽滤或板框压滤。
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