[发明专利]一种检测二甲戊灵的试纸条及其制备方法和应用

说明书

一种检测二甲戊灵的试纸条及其制备方法和应用，该试纸条包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板；其特征是：反应膜上具有包被有二甲戊灵半抗原‑载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，结合物释放垫上喷涂有二甲戊灵单克隆抗体‑胶体金标记物。二甲戊灵半抗原是由N‑(1‑乙基丙基)‑3,4‑二甲基苯胺与4‑溴丁酸乙酯反应生成烃基化N‑(1‑乙基丙基)‑3,4‑二甲基苯胺，再与浓硝酸反应生成硝基烃化N‑(1‑乙基丙基)‑3,4‑二甲基苯胺，然后与KOH反应得到。本发明的优点在于：操作简单、灵敏度高、检测速度快、成本低、不受检测设备限制，可实现对大批量二甲戊灵样品进行快速检测和现场监控。

技术领域

本发明涉及胶体金试纸条领域，具体是一种用于检测二甲戊灵的试纸条及其制备方法和应用，其特别适用于烟叶中二甲戊灵残留的检测。

背景技术

二甲戊灵（Pendimethalin）属于二硝基苯胺类除草剂，其作用机制为抑制分生组织细胞分裂。双子叶植物吸收二甲戊灵的部位为下胚轴，单子叶植物吸收部位为幼芽。二甲戊灵适用于玉米、大豆、小麦、花生、棉花等多种旱地作物防除马唐、狗尾草、马齿苋等一年生禾本科和阔叶杂草。烟草上主要用于化学抑芽和烟草杂草防除。依据中国农药急性毒性分级标准，二甲戊灵被划分为一种低毒的化合物。依据美国环保局EPA的毒物分类标准，二甲戊灵属于III类，低毒化合物，安全摄入量为每天0.13mg/kg。根据我国2016年发布的国家标准《GB2763-2016食品中农药最大残留限量》的规定，稻谷、韭菜、结球甘蓝、普通白菜、菠菜、芹菜、大白菜中二甲戊灵的最大残留限量为0.2 mg/kg，糙米、玉米、棉籽、大蒜、莴苣中二甲戊灵的最大残留限量为0.1 mg/kg。国际烟草科学研究合作中心（CORESTA）规定烟草中二甲戊灵的指导性残留限量为5 mg/kg。

目前二甲戊灵的检测方法主要是仪器检测方法，如气相色谱法、气相色谱-质谱法、气相色谱串联质谱法、高效液相色谱法、液相色谱串联质谱法，等。但是由于仪器设备昂贵，技术水平要求较高，样品还需要进行纯化处理，不利于现场筛查。因此，开发一种不受检测设备限制并且能够实现对大批量样品进行快速检测的产品和方法成为迫切需要解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于克服现有检测二甲戊灵的方法存在的对设备依赖性高，并且不能够实现对大批量样品快速检测的问题，提供一种操作简单、灵敏度高、检测速度快、成本低、不受检测设备限制的试纸条及其制备方法和应用，以实现对大批量样品中二甲戊灵的快速检测和现场监控。

为了实现本发明的目的，本发明提供了一种检测二甲戊灵的试纸条，该试纸条包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板；其中，所述反应膜上具有包被有二甲戊灵半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，所述结合物释放垫上喷涂有二甲戊灵单克隆抗体-胶体金标记物；所述二甲戊灵单克隆抗体是以二甲戊灵半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，所述二甲戊灵半抗原-载体蛋白偶联物由二甲戊灵半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白或人血清白蛋白，所述二甲戊灵半抗原是由N-(1-乙基丙基)-3,4-二甲基苯胺与4-溴丁酸乙酯反应生成烃基化N-(1-乙基丙基)-3,4-二甲基苯胺，再与浓硝酸反应生成硝基烃化N-(1-乙基丙基)-3,4-二甲基苯胺，再与氢氧化钾反应得到，其分子结构式为：

所述二甲戊灵半抗原的具体制备方法如下：

1）取1.00 g N-(1-乙基丙基)-3,4-二甲基苯胺，加80 mL丙酮溶解，加0.35 g 氢氧化钾，加1.21 g 4-溴丁酸乙酯，加热回流反应3 h，TLC检测，原料全部反应完成，停止反应，冷却到室温，旋蒸，除去丙酮，加60 mL水，加50 mL二氯甲烷萃取，有机相无水硫酸钠干燥，蒸干浓缩，上硅胶柱，使用体积比为10:1的石油醚/乙酸乙酯洗脱分离，得到中间体烃基化N-(1-乙基丙基)-3,4-二甲基苯胺1.51 g；