[发明专利]一种检测仲丁灵的试纸条及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种检测仲丁灵的试纸条及其制备方法和应用，该试纸条包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板；其特征在于：所述反应膜上具有包被有仲丁灵半抗原‑载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，所述结合物释放垫上喷涂有仲丁灵单克隆抗体‑胶体金标记物，所述仲丁灵半抗原是由4‑氯‑3,5‑二硝基苯乙酸与丁胺反应得到。本发明还提供一种应用上述试纸条检测样品中仲丁灵的方法。本发明提供的试纸条和检测方法具有操作简单、灵敏度高、检测速度快、成本低、不受检测设备限制的优点，能够实现对大批量的仲丁灵样品进行快速检测和现场监控。

技术领域

本发明涉及仲丁灵的检测，具体是一种检测仲丁灵的试纸条及其制备方法和应用，其特别适用于烟草及烟草制品中仲丁灵残留的检测。

背景技术

仲丁灵（Butralin）又名地乐胺、双丁乐灵、硝苯胺灵、比达宁、止芽素，化学名称为N-仲丁基-4-特丁基-2,6-二硝基苯胺，分子式为C₁₄H₂₁N₃O₄。仲丁灵为二硝基苯胺类除草剂，纯品为橙黄色结晶体，易溶于有机溶剂，而难溶于水，有挥发性，受光后易分解，对人畜等动物类毒性较低。该药为选择性萌前除草剂，其作用与氟乐灵相似。药剂进入植物体后，主要抑制分生组织的细胞分裂，从而抑制杂草的幼芽及幼根生长，导致杂草死亡。仲丁灵可应用于大田作物抑制杂草生长，也可用于水产养殖清除水体中的杂藻，仲丁灵在烟草生产中应用较多，主要用来抑制烟草叶芽生长。国际烟草科学研究合作中心（CORESTA）规定烟草中仲丁灵的指导性残留限量为5 mg/kg。

目前，有关仲丁灵残留检测的研究多集中在气相色谱法、液相色谱法、气相色谱串联质谱法、液相色谱串联质谱等色谱质谱方法，仪器方法虽具备检测灵敏度高、特异性强等优势，但是样本前处理繁琐、耗时，需要昂贵的大型仪器和设备，配备专业的检测技术人员进行操作和管理，无法进行现场大规模检测，时效性差。因此，开发一种不受检测设备限制并且能够实现对大批量样品进行快速检测的产品和方法成为迫切需要解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于克服现有的检测仲丁灵的方法存在的对设备依赖性高，并且不能够实现对大批量样品的快速检测的特点，提供一种操作简单、灵敏度高、检测速度快、成本低、不受检测设备限制的试纸条及其制备方法和应用，以实现对大批量的仲丁灵样品进行快速检测和现场监控。

为了实现本发明的目的，本发明提供了一种检测仲丁灵的试纸条，该试纸条包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板；其中，所述反应膜上具有包被有仲丁灵半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，所述结合物释放垫上喷涂有仲丁灵单克隆抗体-胶体金标记物，所述仲丁灵单克隆抗体是以仲丁灵半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，所述仲丁灵半抗原-载体蛋白偶联物由仲丁灵半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白或人血清白蛋白，所述仲丁灵半抗原是由4-氯-3,5-二硝基苯乙酸与丁胺反应得到，其分子结构式为：

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所述仲丁灵半抗原的具体制备方法如下：

取4-氯-3,5-二硝基苯乙酸1.00 g，加50 mL乙醇溶解，加碳酸钠0.45 g，搅拌，加丁胺0.31 g，80℃油浴加热，搅拌3 h，检测，原料基本反应完全；停止反应，冷却到室温，旋蒸，除去乙醇，加80 mL水，用1 mol/L盐酸调节pH值到4，有大量浑浊，加80 mL乙酸乙酯萃取，水洗，上硅胶柱，用体积比为5:1的二氯甲烷/甲醇洗脱分离，得到仲丁灵半抗原产物1.05 g。

所述羊抗鼠抗抗体是以鼠源抗体为免疫原对山羊进行免疫制备获得。

所述样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫依次粘贴在底板上，所述结合物释放垫1/3~1/2被覆盖于样品吸收垫下。