[发明专利]一种检测二甲戊灵的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用

说明书

一种检测二甲戊灵的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用。该试纸条包括底板、样品吸收垫、结合物释放垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，结合物释放垫上包埋有荧光微球标记的二甲戊灵单克隆抗体，硝酸纤维素膜上固定有检测区和质控区，检测区喷涂有二甲戊灵半抗原‑载体蛋白偶联物，质控区喷涂有羊抗鼠抗抗体，二甲戊灵半抗原是由N‑(1‑乙基丙基)‑3,4‑二甲基苯胺与4‑溴丁酸乙酯反应生成烃基化N‑(1‑乙基丙基)‑3,4‑二甲基苯胺，再与浓硝酸反应生成硝基烃化N‑(1‑乙基丙基)‑3,4‑二甲基苯胺，然后与KOH反应得到。本发明提供的试纸条和检测方法具有操作简单、灵敏度高、检测速度快、成本低的优点。

技术领域

本发明属于农药残留检测领域，具体涉及一种检测烟草及烟草制品中二甲戊灵的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用。

背景技术

二甲戊灵（Pendimethalin）属于二硝基苯胺类除草剂，其作用机制为抑制分生组织细胞分裂。双子叶植物吸收二甲戊灵的部位为下胚轴，单子叶植物吸收部位为幼芽。二甲戊灵适用于玉米、大豆、小麦、花生、棉花等多种旱地作物防除马唐、狗尾草、马齿苋等一年生禾本科和阔叶杂草。烟草上主要用于化学抑芽和烟草杂草防除。依据中国农药急性毒性分级标准，二甲戊灵被划分为一种低毒的化合物。依据美国环保局EPA的毒物分类标准，二甲戊灵属于III类，低毒化合物，安全摄入量为每天0.13mg/kg。根据我国2016年发布的国家标准《GB2763-2016食品中农药最大残留限量》的规定，稻谷、韭菜、结球甘蓝、普通白菜、菠菜、芹菜、大白菜中二甲戊灵的最大残留限量为0.2 mg/kg，糙米、玉米、棉籽、大蒜、莴苣中二甲戊灵的最大残留限量为0.1 mg/kg。国际烟草科学研究合作中心（CORESTA）规定烟草中二甲戊灵的指导性残留限量为5 mg/kg。

目前，常用检测方法有气相色谱法、气相色谱-质谱联用法、高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法等。由于以上方法均需先进检测仪器、检测费用昂贵、步骤繁琐、耗时，且对操作人员专业性要求较高，不适用于基层企事业单位的高通量快速筛查检测。因此，开发一种不受检测设备限制并且能够实现对大批量样品进行快速检测的产品和方法成为迫切需要解决的问题。

荧光微球免疫层析技术是在荧光染料标记技术上发展起来的，作为一种免疫学检测方法，它是免疫亲和技术、免疫标记技术、免疫层析技术的结合，具有快速、操作简便等优点。相比传统标记物，荧光微球的发光强度可以随激发光的强度增强而增强，所以荧光微球标记有望提高免疫层析技术的检测限；而在微球壳结构的作用下，荧光微球具有相对稳定的形态结构，粒度均一、单分散性好、稳定性好、发光效率高、重复性好，有较好的生物相容性；形成微球后染料荧光猝灭大大减少，发射强而稳定，且基本不受外界环境介质变化的影响。因此相比上述检测方法，荧光微球免疫层析技术同时具有检测灵敏度高、操作简便、稳定性好的优点。

发明内容

本发明的一个目的是针对上述现有技术的缺陷，提供一种灵敏度高、操作简便、检测快速、价格低廉的检测二甲戊灵的时间分辨荧光免疫层析试纸条；本发明的另一个目的是提供上述试纸条的制备方法；本发明的再一个目的是提供上述试纸条在检测二甲戊灵中的应用。

为了实现上述目的，本发明采取的一个技术方案是：

提供一种检测二甲戊灵的时间分辨荧光免疫层析试纸条，它包括底板及在底板上依次搭接粘贴的样品吸收垫、结合物释放垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述结合物释放垫上包埋有荧光微球标记的二甲戊灵单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上固定有检测区和质控区，所述检测区喷涂有二甲戊灵半抗原-载体蛋白偶联物，所述质控区喷涂有羊抗鼠抗抗体。