[发明专利]一种巴伦葛兹类芽孢杆菌β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶及其编码基因与应用

权利要求书

1.氨基酸序列如序列表中序列1所示的蛋白质在水解几丁二糖中的应用。

2.制备N-乙酰氨基葡萄糖的方法，为方法A或方法B或方法C；

所述方法A包括如下步骤：采用权利要求1中所述的蛋白质水解几丁二糖，制备β-N-乙酰氨基葡萄糖；所述水解的液体环境为pH 5.5、50 mM乙酸-乙酸钠缓冲液；所述水解的温度为60℃；所述的蛋白质在水解体系中的浓度为1 U/mL；

所述方法B包括如下步骤：采用权利要求1中所述的蛋白质水解几丁寡糖，制备β-N-乙酰氨基葡萄糖；所述几丁寡糖的聚合度为3-5；所述水解的液体环境为pH 5.5、50 mM乙酸-乙酸钠缓冲液；所述水解的温度为60℃；所述的蛋白质在水解体系中的浓度为1 U/mL；

所述方法C包括如下步骤：采用权利要求1中所述的蛋白质和几丁质酶协同水解几丁质制备β-N-乙酰氨基葡萄糖；所述的蛋白质在水解体系中的浓度为1 U/mL；所述几丁质酶在水解体系中的浓度为5 U/mL；所述水解的液体环境为pH 5.5、20 mM的柠檬酸柠檬酸钠缓冲液；所述水解的温度为55℃；

所述几丁质需经过预处理，所述预处理方法为：（1）取几丁质粉末，与球磨珠按照体积比2：1混合，球磨机转速380 r/min，功率4 kW，球磨4 h后取出放置干燥箱中；（2）将步骤（1）得到的球磨几丁质与天然低共熔溶剂混合，球磨几丁质在溶液中的质量百分含量为3%，110℃反应40 min后取出，在冰上加入过量的蒸馏水，11510 g离心6 min，收集沉淀，加入过量的蒸馏水重悬，超声5 min，以上步骤重复3次，最后将预处理过后的几丁质粉末冻干备用；所述天然低共熔溶剂的制备方法为：分别以1:2的摩尔比例精确称取一定量的氯化胆碱和乳酸，混合后80℃水浴 2 h直至获得澄清透明液体，放置干燥箱中1-2周。

3.包括权利要求1中所述蛋白质和几丁质酶的组合物在制备产品中的应用，所述产品的功能为催化几丁质转化为N-乙酰氨基葡萄糖。

4.包括权利要求1中所述蛋白质和几丁质酶的组合物在制备N-乙酰氨基葡萄糖中的应用。