[发明专利]水栀子中3;4-裂环环菠萝蜜烷型栀子新萜A和栀子新萜F的制备方法及其应用

说明书

本发明涉及水栀子中3,4‑裂环环菠萝蜜烷型栀子新萜A和栀子新萜F的制备方法及其应用，有效解决快速从水栀子中制备两个具有肾细胞保护活性的3,4‑裂环环菠萝蜜烷型三萜类化合物的问题，方法是，将水栀子粉碎，丙酮组织破碎提取，减压浓缩，浓缩物用蒸馏水混悬，依次加入石油醚、乙酸乙酯，减压回收溶剂，得水栀子粗提取物；水栀子粗提取物经硅胶柱色谱初步分离，采用体积比为100:1、50:1、30:1的二氯甲烷‑甲醇系统进行梯度洗脱，收集二氯甲烷‑甲醇体积比为50:1、30:1洗脱流份；二氯甲烷‑甲醇体积比为50:1洗脱流份经硅胶柱色谱进一步分离，得栀子新萜A；二氯甲烷‑甲醇体积比为30:1洗脱流份经ODS柱色谱进一步分离，得栀子新萜F；本发明方法稳定可靠，效率高。

技术领域

本发明涉及医药，特别是一种水栀子中3,4-裂环环菠萝蜜烷型栀子新萜A和栀子新萜F的制备方法及其应用。

背景技术

脓毒症是由感染引起的全身炎症反应，常常引起多组织损伤及功能障碍。目前，脓毒症已成为重症监护病房(ICU)患者死亡的主要原因，是1～7岁患儿的第七大致死原因和65～75岁老人的第八大致死原因。急性肾损伤(AKI)是临床脓毒症发病过程中最严重、最常见的并发症之一。AKI的发病率会随着脓毒症的发展而增加，脓毒症合并AKI后病死率增加1倍，明显高于其它因素导致的急性肾功能衰竭。目前临床上广泛使用的肾细胞保护药物主要包括HMG-COA还原酶抑制剂、血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)和血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)等。由于多数合成药基于单靶点的作用，对于肾损伤的复杂的病因，很难取得理想的治疗效果。

水栀子为茜草科(Rubiaceae)栀子属植物水栀子(Gardenia jasminoidesvar.radicans)的干燥成熟果实。历代本草学著作，如《雷公炮制论》，《八闽通志》等均有关于水栀子的相关记载，在我国民间，水栀子根、叶及果实可入药，具有解热凉血、镇静止痛、疏风解湿的功效。水栀子分布广泛，在我国长江以南的多个省区均有分布或人工栽培，主要产区在湖北、湖南、四川、江西、福建、浙江等省。化学成分研究表明水栀子除了含有环烯醚萜类和单萜类化合物以外，近年来的研究发现水栀子还含有大量的三萜类化合物，同样具有多样的生物活性，如抗肿瘤，抑制肿瘤细胞血管生长以及抗炎等活性。本发明采用硅胶柱色谱法富集目标成分，再用硅胶、ODS等柱色谱法结合制备液相分离纯化，建立了水栀子中两个痕量的3,4-裂环环菠萝蜜烷型三萜类化合物栀子新萜A和栀子新萜F的快速制备方法。该方法分离效率高、时间短，溶剂消耗量小，样品回收率高，得到的目标成分纯度高。这两个化合物均为未见文献报道的新化合物。

中草药在细胞保护方面的应用历史悠久，从中草药中寻找具有肾细胞保护的活性物质，研制特异性强、毒副作用小的新型药物具有重要的社会效益和经济效益。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种水栀子中3,4-裂环环菠萝蜜烷型栀子新萜A和栀子新萜F的制备方法及其应用，可有效解决快速从水栀子中制备两个具有肾细胞保护活性的3,4-裂环环菠萝蜜烷型三萜类化合物的问题。

本发明解决的技术方案是，一种水栀子中3,4-裂环环菠萝蜜烷型栀子新萜A和栀子新萜F，所述的三萜类化合物栀子新萜A和栀子新萜F分子结构式(化学结构式)为：

其制备方法包括以下步骤：

(1)制备粗提取物，方法是，将水栀子粉碎，过40目筛，每次用水栀子重量6-9倍量的体积浓度为50％的丙酮组织破碎提取3次，每次1-3min，合并丙酮提取液，减压浓缩，得浓缩物，加浓缩物重量体积3-5倍量的蒸馏水混悬，依次加入与混悬液等体积的石油醚、乙酸乙酯，减压回收溶剂，得到乙酸乙酯萃取部位的浸膏，即为水栀子粗提取物；所述的重量体积是指固体物以g计，液体物以ml计，以下同，如浓缩物为1g时，蒸馏水为3-5ml；