[发明专利]一种砗磲外套膜色素混合物及其提取和浓度测量方法

说明书

一种砗磲外套膜色素混合物及其提取和浓度测量方法，属水生动物天然色素提取技术领域，所述提取方法包括如下步骤：剪下砗磲整个外套膜，去除外套膜底部无色素部分；将外套膜剪成小块进行冷冻；将冷冻好的组织块转移至预冷的研钵中，加入液氮，研磨至组织呈粉末状；将研磨好的组织转移至锡箔纸中，包裹，然后置于低温冷冻干燥机中真空干燥，而后将干燥后的样品分装并转移至‑20℃备用；用丙酮或乙醇萃取，最后用滤膜过滤，获得外套膜色素提取物；用可见分光光度计测量外套膜混合提取物的吸光度值表示其浓度。本发明首次分离出砗磲外套膜色素混合物并进行了定量，可为砗磲外套膜颜色相关实验的开展提供技术支持；本发明提取方法对技术装备要求不高，适合于普通实验室。

技术领域

本发明属水生动物天然色素提取技术领域，具体地涉及一种砗磲外套膜色素混合物及其提取和浓度测量方法。

背景技术

砗磲属软体动物门双壳纲帘蛤目砗磲科，是海洋中最大的双壳贝类。鲜艳醒目的外套膜是砗磲区别于其它双壳贝类的主要特征之一。砗磲外套膜颜色十分复杂，以我国南海番红砗磲为例，其外套膜颜色有红色、蓝色、黄色、棕色、橙色以及其它点缀色和花纹等。相关研究表明，砗磲外套膜颜色与其能量获取、隐态保护和躲避敌害关系密切。然而，现有研究多通过现场拍照方法对砗磲外套膜颜色进行定性分析，对外套膜颜色密切相关的色素组成、代谢等更深层次的机理问题尚未涉及，而获取高纯度砗磲外套膜色素是开展上述研究的前提。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种砗磲外套膜色素混合物及其提取和浓度测量方法。所述提取方法简易，并能够快速获得砗磲外套膜色素混合物，然后通过测定其在特定波长的吸光度值对色素浓度进行定量分析。

本发明是通过采用如下技术方案实现的：

一种砗磲外套膜色素混合物，所述混合物的提取方法包括如下步骤：

1)取材：剪下砗磲整个外套膜，去除外套膜底部无色素部分，为防止色素光解氧化，后续操作避免强光照射；

2)前处理：

①将外套膜剪成小块，放置于-20℃冰箱中冷冻4h以上；

②将冷冻好的组织块转移至液氮预冷的研钵中，加入液氮，研磨至组织呈粉末状；

3)低温冷冻干燥：将研磨好的组织转移至锡箔纸中，包裹，包裹要求透气但不透光，然后置于低温冷冻干燥机中-50℃冷冻真空干燥6-8h，而后将干燥后的样品分装至离心管中，用锡箔纸包裹后转移至-20℃备用；

4)萃取：

①称取外套膜样品于离心管中，加入丙酮或乙醇溶解，所述的丙酮或乙醇均为分析纯级；加入丙酮的液料比20-40:1，单位为ml/g，萃取温度24-26℃；加入乙醇的液料比100-200:1，单位为ml/g，萃取温度33-35℃；

②溶解4-5h，用0.45μm的针筒式滤膜过滤器过滤，获得外套膜色素提取物。

本发明还提供一种砗磲外套膜色素混合物浓度的测量方法，具体步骤如下：

①丙酮作为溶剂：用丙酮将外套膜色素提取物稀释20-50倍后，用可见分光光度计测量其在波长462nm的吸光度值，色素提取物浓度可表示为OD₄₆₂*稀释倍数；或者②乙醇作为溶剂：用乙醇将外套膜色素提取物稀释5-10倍后，用可见分光光度计测量波长450nm吸光度值，色素提取物浓度可表示为OD₄₅₀*稀释倍数。

本发明与现有技术相比的有益效果：

本发明的砗磲外套膜色素提取及浓度测量方法，首次提供了一种对砗磲外套膜色素浓度进行量化的方法，可为砗磲外套膜颜色相关实验的开展提供技术支持；本发明所涉及的试剂、仪器等均较为常见，且提取、量化步骤简单，适合于大部分实验室。

具体实施方式