[发明专利]红球姜中球姜酮对照品的制备方法

说明书

本发明公开了一种红球姜中球姜酮对照品的制备方法，本发明以鲜的红球姜地下根茎为原料，提取挥发油，通过重结晶方法制备球姜酮对照品，所制备获得的球姜酮纯品，经HPLC检测，在不同流动相和色谱柱测定结果均为一个主色谱峰，改变流动相和色谱柱测定均未出现异常峰，以面积归一化法测定对照品纯度大于99％，符合含量测定用中药化学对照品的要求。

技术领域

本发明涉及一种分离纯化技术，尤其是以鲜的红球姜地下根茎为原料，提取挥发油，通过重结晶制备球姜酮对照品的方法。

背景技术

红球姜(Zingiber zerumbet(L.)Smith)为姜科姜属多年生草本植物。即可药用，又可食用，其地下根茎可作为开胃菜和食品调味料。据《广西植物名录》记载，红球姜的根茎具有祛风解毒，治肚痛、腹泻的功能，现代药理学研究表明，红球姜具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抗过敏、抗微生物、抗高血糖及镇痛等药理作用。

球姜酮作为红球姜的主要药理活性成分，属于倍半萜类化合物。国内外文献报道表明，球姜酮具有抗恶性肿瘤活性、抗炎活性、抗菌活性、抗骨质疏松活性，以及保肝作用、镇痛作用和改善糖尿病作用。目前研究表明，球姜酮作为抗癌药物的潜在候选者，具有广阔的应用前景。因此，如何制备高纯度的球姜酮对照品，是需要解决的。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种红球姜中球姜酮对照品的制备方法，以新鲜的红球姜地下根茎为原料，提取挥发油，通过重结晶制备球姜酮对照品，它能从红球姜中分离获得纯度极高的球姜酮。

本发明是这样实现的：以鲜的红球姜地下根茎为原料，提取挥发油，通过重结晶方法制备球姜酮对照品，包括如下工艺步骤：

(1)红球姜挥发油的提取：将鲜的红球姜地下根茎粉碎，将原料与蒸馏水按1:2-1:5的料液比，在挥发油提取器中提取2h-6h，经正己烷萃取，用无水硫酸钠除水后过滤，减压浓缩除正己烷后得红球姜挥发油；

(2)重结晶分离纯化得到球姜酮对照品：将红球姜挥发油中加入正己烷，挥发油与正己烷的料液比为2:1-1:2，加热溶解后，在-22℃下重结晶5min-30min，抽滤得球姜酮晶体粗品；再将球姜酮晶体粗品中加入正己烷，挥发油与正己烷的料液比为2:1-1:2，加热溶解后，在-22℃下重结晶5min-20min，抽滤，得到纯度为99％以上的球姜酮纯品。

为了进一步验证本发明的技术效果，进行了如下实验：

1球姜酮单体化合物的分离

1.1红球姜挥发油的提取

称取鲜的红球姜地下根茎500g，粉碎后，置于2L圆底烧瓶中，加入数粒玻璃珠和蒸馏水1000mL，搅匀后，置于电热套，连接挥发油提取装置。从冷凝管的上端加入蒸馏水，直至蒸馏水从挥发油测定管中溢流入圆底烧瓶为止。加热保持微沸4h。将提取器中的水和挥发油放出，经适量正己烷萃取，用适量无水硫酸钠除水后过滤，减压浓缩除正己烷后得红球姜挥发油，得挥发油0.51g.

1.2重结晶分离得到球姜酮对照品

在红球姜挥发油中加入0.3mL的正己烷，在40℃加热摇匀溶解，在-22℃下冷藏15min，析出晶体后，抽滤得球姜酮晶体粗品；再将球姜酮晶体粗品中加入0.2mL正己烷，在40℃加热摇匀溶解，在-22℃下冷藏10min，抽滤，得到纯度为99％以上的球姜酮纯品0.32g。经MS，¹H-NMR，¹³C-NMR进行测定确认。

1.3结论