[发明专利]一种提高白藜芦醇累积量的生物方法在审
| 申请号： | 201811112051.8 | 申请日： | 2018-09-17 |
| 公开（公告）号： | CN109609421A | 公开（公告）日： | 2019-04-12 |
| 发明（设计）人： | 许激扬;卞筱泓;王郑隆 | 申请（专利权）人： | 中国药科大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12P7/22;C12R1/19 |
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| 地址： | 211198 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 白藜芦醇 合成酶 丙二酰辅酶A 合成酶系 大肠杆菌菌株 重组质粒 累积量 基因缺陷型 培养基优化 延胡索酸酶 基因缺陷 原始菌株 载体片段 工程菌 构建 两段 发酵 转化 | ||
1.一株能合成白藜芦醇的大肠杆菌菌株，其特征在于，包括pCDF-Rgtal-Pc4cl-Ahsts重组质粒和pACYC-accBC-PTDH重组质粒。Rgtal，Pc4cl和Ahsts基因用于合成白藜芦醇，accBC用于提高丙二酰CoA含量，PTDH用于提高ATP含量，载体片段分别为pCDFDuet-1和pACYC Duet-1。
2.如权利要求1所述的共表达重组质粒，其特征在于，所述Rgtal和accBC基因分别位于pCDFDuet-1和pACYC Duet-1的第一个多克隆位点，Pc4cl，Ahsts和PTDH基因分别位于pCDFDuet-1和pACYC Duet-1的第二个多克隆位点。
3.权利要求1-2中任一项所述的共表达重组质粒的构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
A)PCR扩增获得Rgtal，Pc4cl，Ahsts，accBC，PTDH基因序列；
B)将Rgtal，Pc4cl和Ahsts序列共同克隆入pCDFDuet-1，accBC，PTDH构建到pACYCDuet-1。
4.一种提高白藜芦醇累积量的生物方法，其特征在于，所述方法为，将权利要求1-3中任一项所述的共表达重组质粒转化累积白藜芦醇基因缺陷型大肠杆菌E.coli BL21菌株，获得重组菌。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，通过发酵培养所述重组菌，用诱导剂IPTG诱导白芦藜醇代谢途径中的两个关键酶基因Rgtal，Pc4cl和Ahsts及促进丙二酰辅酶A的表达的基因accBC，提高白藜芦醇的合成。
6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，优化碳源后，白藜芦醇的最高产量可达22.62mg/L。
7.如权利要求4所述的方法，其特征在于，优化氮源后，白藜芦醇的最高产量可达19.00mg/L。
8.如权利要求4所述的方法，其特征在于，优化微量元素后，白藜芦醇的最高产量可达21.42mg/L。
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