[发明专利]检测结核杆菌复合群和鸟-胞内分枝杆菌复合群的试剂盒

说明书

本发明公开了检测结核杆菌复合群和鸟－胞内分枝杆菌复合群的试剂盒，属于生物医学检测技术领域，试剂盒包括检测扩增引物对、杂交膜条和杂交显色液，杂交膜条上附着有探针，杂交显色液包含连接有第二显色标记物的微球，微球富集后显色。本发明试剂盒可以实现单种微生物的检测，更能实现同时检测并区分两类病原微生物的感染，为结核分枝杆菌复合群和鸟－胞内分枝杆菌复合群的筛查提供了一个简单、快速、廉价的选择。

技术领域

本发明属于生物医学检测技术领域，尤其涉及检测结核杆菌复合群和鸟-胞内分枝杆菌复合群的试剂盒。

背景技术

结核病是危害国民健康的重大传染病，我国是主要的结核病发病大国之一。由于结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex,MTBC)的特殊性，其检测和治疗一直是制约人类攻克结核病的瓶颈。结核病的传统诊断方法是基于培养技术，一般培养需要3～4周才能得到结果；即使是最先进的液体培养技术，也需要10天左右才能得到检查结果；这给结核病的筛查、确诊带来严峻挑战。

随着分子检测技术的出现，因其卓越的灵敏度和特异性表现，其为结核病的筛查和诊断提供了有利的工具。近年来，越来越多的报道显示我国的结核病发病率虽然得到了一定控制，但结核病的诊疗负担一直非常严重。另外，非典型结核分枝杆菌的检出率呈逐年递增的态势，鸟-胞内分枝杆菌复合群(Mycobacterium avium-intracellulare complex，MAC)是主要的非典型结核分枝杆菌复合群，特别是HIV合并感染者，鸟分枝杆菌阳性检出率高居非典型分枝杆菌的首位。

结核分枝杆菌复合群因其高传染风险和严重的感染危害，要求我们开发出一种简便有效并且可以避免操作风险的检测系统；而非典型结核分枝杆菌，特别是鸟-胞内分枝杆菌复合群的检出率的逐年上升，其临床症状与结核分枝杆菌复合群感染相似，且对一线结核药物呈耐药性，因此要求我们开发出一种可以检测并区分结核分枝杆菌复合群和非典型结核分枝杆菌病原体感染的检测试剂。

基于以上重要的现实问题，我们开发一种简便、安全、有效和廉价的检测试剂。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术不足，而提供以单链杂交技术为基础的检测结核分枝杆菌复合群和鸟-胞内分枝杆菌复合群的杂交膜条和试剂盒，该杂交膜条和试剂盒能简便、安全和有效检测出结核分枝杆菌复合群和/或鸟-胞内分枝杆菌复合群。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种用于检测结核分枝杆菌复合群的MTBC扩增引物对，MTBC扩增引物对的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，MTBC扩增引物对的正向引物5’端还连接有如SEQ ID NO.3所示的标签序列，MTBC扩增引物对的反向引物5’端还连接有第一显色标记物，第一显色标记物能与结合有微球的第二显色标记物相连接，微球富集后显色。

优选地，MTBC扩增引物对的正向引物和反向引物是相对的，若其中一个为正向引物，另一个则是反向引物。

作为上述技术方案的改进，第一显色标记物为生物素，第二显色标记物为链霉亲和素，微球为富集后显示蓝色的乳胶微球。

另外，本发明还提供一种用于检测鸟-胞内分枝杆菌复合群的第二检测扩增引物对，MAC扩增引物对的序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示，MAC扩增引物对的正向引物5’端还连接有如SEQ ID NO.6所示的标签序列，MAC扩增引物对的反向引物5’端还连接有第一显色标记物，第一显色标记物能与结合有微球的第二显色标记物相连接，微球富集后显色。

优选地，MAC扩增引物对的正向引物和反向引物是相对的，若其中一个为正向引物，另一个则是反向引物。

作为上述技术方案的改进，第一显色标记物为生物素，第二显示标记物为链霉亲和素，微球为富集后显示蓝色的乳胶微球。