[发明专利]亚油酸-环糊精分子的合成及其形成的聚集体作为药物递送系统的应用

权利要求书

1.本发明β-CD-LA胶束及负载阿霉素(Dox)的纳米药β-CD-LA-Dox；其中，使用的环糊精为6A-Amino-3A-deoxy-(2AS,3AS)-β-cyclodextrin Hydrate(β-CD-NH₂)，亚油酸(Linoleic acid，简写为LA)，两者经酰胺反应偶合在一起形成β-CD-NH-CO-LA(β-CD-LA)分子式如下：

2.本发明β-CD-LA胶束及负载阿霉素的纳米药β-CD-LA-Dox的制备方法是首先合成β-CD-LA分子，然后确定β-CD-LA分子能否在水中进行自组装及自组装后的胶束形貌；其次，将亲脂性的抗癌药物阿霉素负载到β-CD-LA胶束中形成β-CD-LA-Dox纳米药，采用有机溶剂挥发法进行阿霉素的包载，并确定包载率；然后，体外模拟肿瘤微环境对β-CD-LA-Dox纳米药进行体外释放研究，确定温度和pH值对β-CD-LA-Dox纳米药体外释放的影响；最后，评价β-CD-LA胶束的细胞毒性及β-CD-LA-Dox纳米药的抗癌活性和抗肿瘤效果。

3.本发明β-CD-LA分子的合成方法：

精密称量取一定量的亚油酸加入到圆底烧瓶中，然后向烧瓶中加入20mL THF，超声将亚油酸溶解。然后，加入DCC、NHS，室温下反应24h。到达规定反应时间后，精密称取一定量的β-CD-NH₂(β-CD-NH₂与亚油酸的摩尔比为1:2)加入到圆底烧瓶中，超声溶解后室温下搅拌反应24h。反应结束后，将反应溶液进行冷冻干燥，得到β-CD-LA粗品。接着进行β-CD-LA的纯化，选用中性氧化铝纯化柱，依次经过乙酸乙酯：石油醚(90:10)和甲醇：水(从90:10到80:20)洗脱，最后将含有β-CD-LA的洗脱液收集并进行冷冻干燥，得到β-CD-LA纯品。

4.本发明采用有机溶剂挥发法对胶束进行阿霉素的包载，得到β-CD-LA-Dox纳米药。

5.本发明采用透析的方法模拟肿瘤微环境对β-CD-LA-Dox纳米药进行体外释放研究，考察了不同温度和不同pH值对β-CD-LA-Dox纳米药释放的影响。发现在37℃条件下Dox能够很好的从β-CD-LA-Dox胶束中释放出来，同时，在较低pH值(pH5.0)条件下的累计释放量明显比正常生理条件下的多，表明β-CD-LA-Dox纳米药具有pH响应性的释放性质。

6.权利要求2所述β-CD-LA胶束的细胞毒性及β-CD-LA-Dox纳米药抗癌活性通过MTT方法进行检测，选用HepG2和MCF-7细胞作为实验对象，通过两种细胞的细胞存活率评价β-CD-LA胶束的细胞毒性及β-CD-LA-Dox纳米药体外抗癌活性。实验表明β-CD-LA胶束具有极低的细胞毒性，而β-CD-LA-Dox纳米药抗癌活性具有剂量依赖性，并且具有较好的抗癌效果。

7.权利要求2所述β-CD-LA胶束及β-CD-LA-Dox纳米药体内实验选用植瘤小鼠作为实验模型，分别尾静脉注射等量的PBS、β-CD-LA胶束、β-CD-LA-Dox纳米药，观察小鼠体重及肿瘤大小变化情况评价β-CD-LA-Dox纳米药抗肿瘤的效果。实验表明：尾静脉注射PBS、β-CD-LA胶束的小鼠的体重没有发生明显的变化，说明β-CD-LA胶束对小鼠体重影响小，而注射β-CD-LA-Dox纳米药的小鼠的体重也没有明显的变化，但是肿瘤体积变小，说明β-CD-LA-Dox纳米药对在小鼠体重影响较小，但是具有良好的抗肿瘤效果。为了进一步研究β-CD-LA-Dox纳米药对肿瘤的影响，小鼠处死后将肿瘤组织进行解剖，解剖后的肿瘤组织进行脱水、石蜡包埋、切片处理，最后对肿瘤组织切片进行HE染色对肿瘤组织中细胞形态进行观察，观察发现注射β-CD-LA胶束的小鼠组织切片中的细胞形态和注射PBS的组织切片中的细胞形态并没有太大的变化，但是注射β-CD-LA-Dox纳米药的小鼠组织切片中的细胞形态发生了明显的变化，细胞核固缩甚至出现了细胞核破裂的情况，组织中有的地方出现了大面积组织坏死情况。说明β-CD-LA-Dox纳米药通过诱导肿瘤组织细胞坏死达到治疗肿瘤的目的。

8.权利要求1所述β-CD-LA胶束及β-CD-LA-Dox胶束可应用于抗癌、抗肿瘤、药物装载材料。