[发明专利]一种复合芽孢杆菌制剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于池塘底质改良的复合芽孢杆菌制剂在改善池塘底质中的应用，其特征在于，所述用于池塘底质改良的复合芽孢杆菌制剂为由枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌以及凝结芽孢杆菌在含有碳酸钙的发酵液中进行液态发酵制备得到；所述发酵液中同时含有锌盐、铁盐和锰盐，所述锌盐为硫酸锌，所述铁盐为硫酸铁，所述锰盐为硫酸锰；且碳酸钙、锌盐、铁盐和锰盐的重量比为5:0.01:0.01:0.01、8:0.1:0.1:0.1或3:0.05:0.05:0.05；所述复合芽孢杆菌制剂中枯草芽孢杆菌的活菌个数为5×10⁸CFU/mL-4×10⁹CFU/mL，纳豆芽孢杆菌的活菌个数为2×10⁸CFU/mL-5×10⁸CFU/mL，蜡状芽孢杆菌的活菌个数为2×10⁸CFU/mL-5×10⁹CFU/mL，凝结芽孢杆菌的活菌个数为5×10⁷CFU/mL-6×10⁸CFU/mL；所述复合芽孢杆菌制剂的pH值为5-7；枯草芽孢杆菌源自广东省微生物菌种保藏中心，编号为：GIM1.271；纳豆芽孢杆菌源自苏州北纳创联生物技术有限公司，编号为：BNCC185324；蜡状芽孢杆菌源自广东省微生物菌种保藏中心，编号为：GIM1.199；凝结芽孢杆菌源自广东省微生物菌种保藏中心，编号为：GIM1.646；

所述液态发酵的方法包括以下步骤：

(1)原菌种活化：将枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌以及凝结芽孢杆菌分别接种到已灭菌的斜面培养基中好氧培养直至长出菌落，分别得到四种活化菌种；培养以上四种芽孢杆菌的斜面培养基的组分相同或不同，且各自独立地含有牛肉膏1-5g、蛋白胨5-15g、氯化钠2-10g、琼脂10-30g以及蒸馏水1L且pH值为7.2-7.5；

(2)一级种子液的制备：分别将步骤(1)得到的四种活化菌种至少部分接种到已灭菌的液体培养基中，之后于35-40℃下好氧培养20-30h，分别得到四种芽孢杆菌原菌液；培养以上四种活化菌种的液体培养基的组分相同或不同，且各自独立地含有牛肉膏1-5g、蛋白胨5-15g、氯化钠2-10g以及蒸馏水1L且pH值为7.2-7.5；

(3)二级种子液的制备：将步骤(2)得到的四种芽孢杆菌原菌液各自独立地按0.5-2wt％的接种量接种到已灭菌的同一发酵液培养基I中，之后于35-40℃下好氧培养20-40h，得到复合芽孢杆菌二级种子液；

(4)益生菌发酵：将步骤(3)得到的复合芽孢杆菌二级种子液按2-10wt％的接种量接种到已灭菌的发酵液培养基II中，之后于35-40℃下好氧培养48-72h，得到用于池塘底质改良的复合芽孢杆菌制剂；

所述发酵液培养基I和发酵液培养基II的组分相同或不同，且各自独立地含有葡萄糖20-30g、酵母膏5-8g、碳酸钙3-8g、铁盐0.01-0.1g、锌盐0.01-0.1g、锰盐0.01-0.1g以及蒸馏水1L且pH值为7.2-7.5。

2.根据权利要求1所述的复合芽孢杆菌制剂在改善池塘底质中的应用，其特征在于，步骤(1)中所述好氧培养的条件包括温度为30-40℃，时间为10-30h；步骤(3)-步骤(4)中所述好氧培养均在搅拌下进行，且搅拌的转速各自独立地为150-200r/min；步骤(3)-步骤(4)中所述好氧培养的通氧气量各自独立地为1-2m³/h。