[发明专利]基于吡啶二甲醛的蛋白质偶联物的制备方法

权利要求书

1.一种制备蛋白质-偶联物的方法，其特征在于，

1)将待修饰蛋白质与式(I)所示化合物进行接触，以便获得经过N末端修饰的所述蛋白质，其中，所述蛋白质N末端的第二个氨基酸不为脯氨酸，

2)将步骤1)所获得的产物与待偶联分子进行亲核加成反应，所述待偶联分子具有羟胺官能团、氨基官能团或肼官能团。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白质为干扰素、绿色荧光蛋白、肌红蛋白、RNA酶、牛血清白蛋白、人血清白蛋白或葡萄糖氧化酶。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述蛋白质在25摄氏度下10-16小时内稳定。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述接触是在25℃的条件下进行16小时。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待修饰蛋白质与式(I)所示化合物的摩尔比为1:200。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述式(I)所示化合物预先溶于pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，所述pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，进一步包括NaCl，乙二胺四乙酸。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待偶联分子具有羟胺官能团，所述亲核加成反应是在温度为4-37℃。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述亲核加成反应是在温度为25℃的条件下进行。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述亲核加成反应是在温度为4-37℃的条件下进行16小时。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)所获得的产物预先溶于pH为5.5的磷酸盐缓冲溶液中，所述pH为5.5的磷酸盐缓冲溶液进一步包括NaCl。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述步骤1)所获得的产物，磷酸盐以及NaCl的摩尔比为0.15:50:150。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待偶联分子具有羟胺官能团，所述待偶联分子具有式(II)所示结构，

其中，A基团独立地为原子转移自由基聚合引发剂、荧光分子、化疗药物、聚合物、小肽、蛋白质、点击化学相关基团。

13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待偶联分子具有式(1)～(7)所示结构，

其中，各a、b、c、d、e、f各自独立地为1-10的正整数；n为25-500，式(7)所示化合物的数均分子量为5000。

14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述式(1)～式(6)所述的化合物与蛋白质的摩尔比为(10-100):1。

15.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述式(7)所述的化合物与蛋白质的摩尔比为(10-300)：1。

16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述式(7)所述的化合物与蛋白质的摩尔比为50:1。

17.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待偶联分子具有式(8)所示结构，所述蛋白质的表面不具有游离巯基；

18.根据权利要求17所述的方法，其特征在于，所述式(8)所述的化合物与所述蛋白质的摩尔比为(10-100):1。