[发明专利]阿替洛尔半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和用途

说明书

本发明提供了一种阿替洛尔半抗原和人工抗原，分子结构式分别为：本发明还公开了此半抗原、人工抗原和以此抗原制备的抗体的制备方法，以及半抗原、抗体的用途。本发明最终制成的抗体检测灵敏度高、特异性强。

技术领域

本发明涉及选择一种具有—COOH的、又最大可能包含阿替洛尔原有结构的化合物作为阿替洛尔半抗原，以此半抗原制成的人工抗原、特异性抗体；以及此类半抗原、人工抗原、特异性抗体的用途，和半抗原、人工抗原、抗体的制备方法。

背景技术

近年来，作为新型环境污染物，药物及个人护理品(PPCPs)由于对人类和水生生物的潜在危害受到极大的关注。这些药物在废水处理厂中不能被完全去除，因此废水处理厂的出水被认为是PPCPs进入水环境的主要来源。由于药物设计上的特点，很多药物对人类和动物具有生理作用，而且难以被生物降解，因此，很多药物在地表水、地下水和近海水中被频繁地检出。阿替洛尔(ATL)是一种常见的β-阻滞剂，主要用于治疗心血管疾病，如高血压、心绞痛和心律不齐。阿替洛尔在欧洲和北美有相当长的使用历史，环境检出浓度相对较高。此外，由于阿替洛尔具有潜在的生态毒性，比如它可以影响心率，使鱼类产生不正常精子或降低精子活动能力，其环境行为和生态风险也受到很大的关注，因此建立一系列速度快、成本低、准确性高的检测方法显得极为迫切。

目前对阿替洛尔的检测主要为仪器方法，如液相色谱法、液相色谱-质谱法等。仪器检测法存在样品前处理繁琐、检测时间长、仪器贵重等缺点，所以在我国无法得到广泛应用，并且不符合现场检测“在短时间内低成本对大量样品进行准确检测和筛选”的要求。酶联免疫吸附测定技术Enzyme-Linked Immunosorbent Assay(ELISA)，是将免疫技术与现代测试手段相结合而建立的一种超微量的测定方法，具有成本低、速度快、灵敏度高、仪器设备简单的特点，适合大批量样品的快速分析。而免疫学检测方法的基础是相应的高特异性、高亲和力的抗体的制备，而阿替洛尔作为小分子化合物，本身不具备免疫原性，因此，其半抗原的结构改造和全抗原合成是建立免疫速测技术的关键和难点之一。

发明内容

针对现有技术中存在的不足之处，本发明提供一种能最大程度保留阿替洛尔的化学结构，又具有一定长度连接臂的半抗原以及这种半抗原的制备方法；以此半抗原制备的人工抗原、检测灵敏度高和特异性强的抗体；以及此半抗原、抗体的用途。

本发明为达到以上目的，是通过这样的技术方案来实现的：提供一种阿替洛尔半抗原，它的分子结构式为：

本发明的半抗原以4-(环氧乙基甲氧基)苯乙酰胺为起始原料，与L-β-高丙氨酸盐酸盐反应生成羧基阿替洛尔，即为阿替洛尔半抗原。反应式如下：

本发明的阿替洛尔半抗原的制备方法进一步描述如下：

取4-(环氧乙基甲氧基)苯乙酰胺0.5g，加60mL乙醇溶解，加1mol/L盐酸0.5mL，搅拌混匀，加L-β-高丙氨酸盐酸盐0.29g，油浴加热搅拌，80℃反应4h；停止反应，旋蒸，除去乙醇，加水80mL，加三氯甲烷100mL×3，萃取三次，合并有机相，蒸干，上硅胶柱层析纯化，体积比为10:1的二氯甲烷-甲醇洗脱，即可得到阿替洛尔半抗原。

上述方法制得的阿替洛尔半抗原，具有阿替洛尔特征结构的同时又具有可以与蛋白质偶联的—COOH结构。

本发明还提供了一种依靠上述阿替洛尔半抗原制得的阿替洛尔人工抗原，它的分子结构式为：

所述载体蛋白为牛血清白蛋白。

本发明的阿替洛尔人工抗原的制备方法描述如下：