[发明专利]一种体外提高CAR-T细胞对于CD19阳性细胞杀伤率的培养方法

权利要求书

1.Retronectin试剂用于提高体外CAR-T细胞对于CD19阳性细胞杀伤率的用途。

2.Retronectin试剂在制备提高体外CAR-T细胞对于CD19阳性细胞杀伤率的制剂方面的用途。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述Retronectin试剂预先在载体上过夜包被。

4.如权利要求1-2任一项所述的用途，其特征在于，所述Retronectin试剂的浓度为20ug/ml-50ug/ml。

5.一种体外提高CAR-T细胞对于CD19阳性细胞杀伤率的培养方法，其特征在于，在T细胞活化阶段用Retronectin试剂处理。

6.如权利要求5所述的培养方法，其特征在于，所述Retronectin试剂预先在载体上过夜包被。

7.如权利要求6所述的培养方法，其特征在于，所述Retronectin试剂过夜包被的温度为4摄氏度。

8.如权利要求5-7任一项所述的培养方法，其特征在于，所述Retronectin试剂的浓度为20ug/ml-50ug/ml。

9.如权利要求8任一项所述的培养方法，其特征在于，所述Retronectin试剂的浓度为20ug/ml。

10.如权利要求5所述的培养方法，其具体步骤为：

1)Retronectin预包被：预先将Retronectin用磷酸缓冲盐溶液(PBS)稀释至20ug/ml-50ug/ml浓度，放入载体中4摄氏度过夜包被；

2)T细胞活化：培养基中，调整外周血单核细胞的细胞起始密度为1-3×10⁶/ml，白介素2的终浓度200-400U/ml，CD3/CD28抗体磁珠与细胞比例为2:1-5:1，加入到用Retronectin预包被的载体中，35-38℃，3-6％CO₂，培养12-48小时；

3)PBMC细胞载体转导：取步骤2所得培养物，保持细胞密度3-5×10⁶/ml，加入载体至与细胞体积比例1:7-12，IL-2的终浓度200-400U/ml，转导2-5小时后补液，使CD19CART-T细胞密度保持在PBMC细胞的起始密度的1/2-1/3；

4)CD19CART-T细胞扩增培养：保持IL-2的浓度，密切注意细胞密度和生长状态，及时补液换液，使CD19CART-T细胞密度保持稳定，培养10-15天。