[发明专利]一种罗非鱼细小病毒TiPV及PCR检测引物及应用

说明书

本发明属于病毒检测领域，具体公开了一种罗非鱼细小病毒（Tilapia parvovirus,TiPV）及PCR检测引物及应用，发明人从患病罗非鱼成鱼中分离出了一种细小病毒，该病毒为罗非鱼细小病毒（Tilapia parvovirus）TiPV，保藏编号为：CCTCC NO：V201856，对于罗非鱼细小病毒的研究具备开拓性的意义。针对该病毒特异性序列设计引物，可对罗非鱼细小病毒进行检测，该引物的特异性好，灵敏度高。

技术领域

本发明属于病毒分子检测技术领域，具体涉及一种罗非鱼细小病毒TiPV及PCR检测引物及应用。

技术背景

细小病毒(Rhabdovirus)是目前为止发现的最小的单股DNA病毒，病毒粒子直径为18～30nm的二十面体，无囊膜，等轴对称。细小病毒在自然界分布极广，可以感染人、脊椎动物及无脊椎动物，并与多种疾病相关。其中人类细小病毒B19(Human parvovirus B19,B19)为人所熟知，能引起幼儿一系列严重的自身免疫性疾病，孕期感染会导致胎儿水肿、流产或先天性感染，对新生儿及幼儿危害较大，引起了世界范围的广泛关注。因此，对细小病毒进行深入研究具有重要意义。此外，细小病毒还能引起家畜多种急性传染病，如犬细小病毒，猪博卡病毒，鹅细小病毒病等。国际病毒分类委员会(International Committee on Taxonomy of Viruses,ICTV)于2014年发表了最新的病毒分类报告，将细小病毒科(Pavoviradae)划分为8个属:Amdoparvovirus、Aveparvovirus、Bocaparvovirus、Copiparvovirus、Depen doparvovirus、Erythroparvovirus、Protoparvovirus、Tetraparvovirus。目前划分的细小病毒属中未出现鱼类感染细小病毒的相关报道，本申请专利中新鉴定的罗非鱼细小病毒属于新病毒，造成我国罗非鱼在短时间内大量死亡，对我国罗非鱼的养殖和出口带来巨大的经济损失。

本申请人曾在罗非鱼中分离过细小病毒，但该病毒未使得罗非鱼有明显发病症状；而本发明公开的细小病毒可致罗非鱼眼珠、鳃盖、下颌和腹部有明显的出血症状。因此基于本发明提供的病毒及其设计的检测引物更具备实际意义，对监测养殖罗非鱼的健康状况显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种罗非鱼细小病毒TiPV，所述的病毒来自患病罗非鱼肾脏组织，该病毒已于2018年9月20日送至中国典型培养物保藏中心进行保藏，分类命名：罗非鱼细小病毒(Tilapia parvovirus)TiPV，保藏编号：CCTCC NO：V201856，地址：中国武汉武汉大学。

本发明的另一个目的在于提供了罗非鱼细小病毒TiPV的特异性基因序列(SEQ IDNO.1所示)，利用该序列与其他病毒的序列的差异设计引物，可用于检测罗非鱼细小病毒TiPV。

本发明还有一个目的在于提供一种罗非鱼细小病毒TiPV PCR检测引物，所述的引物为F1：5'-TATCCAGTCCCGACCTACTCAAA-3'，R1：5'-AGTTAAAACTAATCGCGTTCTTCCC-3'；F2：5'–CACGTTAAGGGCGTATCGTGTAA-3'，R2：5'-TATCTGCTGCTGTTGGTGTTGGT-3'。

本发明还有一个目的在于提供了罗非鱼细小病毒TiPV的应用，所述的应用包括利用该病毒制备成罗非鱼细小病毒病疫苗，或是制备成罗非鱼细小病毒的实验室对照品。

本发明的最后一个目的在于提供一种罗非鱼细小病毒TiPV PCR检测引物的应用，包括利用所述的应用制备成罗非鱼细小病毒检测试剂盒。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：