[发明专利]用于致病性大肠埃希氏菌检测的多核苷酸、方法和试剂盒

说明书

本发明提供了用于致病性大肠埃希氏菌检测的多核苷酸、方法和试剂盒，具体地，本发明公开了能够用于致病性大肠埃希氏菌检测的引物对和探针，对目标菌株的DNA进行实时荧光PCR检测时，具有极佳的特异性和灵敏度，并且稳定性良好。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及用于致病性大肠埃希氏菌检测的多核苷酸、方法和试剂盒。

背景技术

大肠埃希氏菌(E.coli)通常称为大肠杆菌，一直被当作正常肠道菌群的组成部分，被认为是非致病菌。直到20世纪中叶，才认识到一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病原性，尤其对婴儿和幼畜，常引起严重腹泻和败血症，根据不同的生物学特性将可致病的大肠杆菌分为5类：致病性大肠杆菌(EPEC)、肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠出血性大肠杆菌(EHEC)、肠黏附性大肠杆菌(EAEC)。

目前，在大肠杆菌检测中常用的检测方法多样，各具特点。传统检测方法需要先分离再培养，然后用经典的方法鉴定，是国际上通用的鉴定细菌的方法。这类培养法耗时长、灵敏度低。免疫学方法简单、方便、迅速，但是交叉反应比较严重、假阳性多、灵敏度偏低。

因此，为了有效地检测致病性大肠杆菌，本领域迫切需要开发特异性好、灵敏度高、简单便捷的致病性大肠杆菌检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于致病性大肠埃希氏菌检测的多核苷酸、方法和试剂盒。

在本发明的第一方面，提供了一种检测致病性大肠埃希氏菌的引物对，所述的引物对选自下组：

SEQIDNO.:1和SEQIDNO.:2所示的引物对；

SEQIDNO.:3和SEQIDNO.:4所示的引物对；和

SEQIDNO.:5和SEQIDNO.:6所示的引物对。

在另一优选例中，所述的引物对选自下组：

SEQIDNO.:1和SEQIDNO.:2所示的引物对；和

SEQIDNO.:3和SEQIDNO.:4所示的引物对。

在另一优选例中，所述的引物对为：

SEQIDNO.:1和SEQIDNO.:2所示的引物对

在另一优选例中，所述引物对用于实时荧光定量PCR。

本发明的第二方面，提供了一种检测致病性大肠埃希氏菌的试剂盒，所述试剂盒包括本发明第一方面所述的引物对。

在另一优选例中，所述试剂盒还包括探针序列，所述探针序列如SEQIDNO.:11所示。

在另一优选例中，所述试剂盒还包括：Taq酶、dNTP、和/或Mg²⁺。

本发明的第三方面，提供了如本发明第一方面所述的引物对、或本发明第二方面所述的试剂盒的用途，用于致病性大肠埃希氏菌的检测。

在另一优选例中，所述检测为非诊断或治疗目的的。

在另一优选例中，所述检测为荧光定量PCR检测。

本发明的第四方面，提供了一种检测致病性大肠埃希氏菌的方法，所述方法包括步骤：

(1)提供待检测样本，并从所述待检测样本中提取DNA；

(2)使用本发明第二方面所述的试剂盒检测步骤(1)提取得到的DNA，从而判断所述待检测样本中是否存有致病性大肠埃希氏菌。

在另一优选例中，所述方法为荧光定量PCR检测方法。