[发明专利]一种用于治疗血液肿瘤的人源嵌合抗原受体及其应用

说明书

本发明涉及一种用于治疗血液肿瘤的人源嵌合抗原受体及其应用，所述人源嵌合抗原受体包含人源的抗CD30的单链抗体、胞外铰链区、跨膜结构域和细胞内信号结构域，所述人源的抗CD30的单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。本发明还涉及编码所述嵌合抗原受体的核酸。通过将本发明中装载嵌合抗原受体的慢病毒载体转导T细胞可得到CAR‑T细胞，从而获得能够高效并且特异性地杀伤CD30阳性的肿瘤细胞，从而为治疗CD30表面抗原阳性的恶性肿瘤，例如霍奇金淋巴瘤等，提供更高效并且副作用和不良反应更少的方法。

技术领域

本发明涉及细胞免疫治疗领域，更特别地，涉及一种用于治疗血液肿瘤的人源嵌合抗原受体，包括其编码序列及应用。

背景技术

CD30是肿瘤坏死因子受体超家族(tumor necrosis factor receptorsuperfamily，TNFRSF)成员之一，属于Ⅰ型跨膜糖蛋白，高表达于霍奇金淋巴瘤(Hodgkinlymphoma，HL)和间变性大细胞淋巴瘤(anaplastic large cell lymphomas，ALCL)，低表达于非病理状态下活化的T细胞、B细胞表面，而正常细胞不表达。早期研究表明，CD30参与细胞活化和分化，NF-κB等信号的传导及T细胞免疫激活等。目前研究证实CD30与细胞的增值和死亡密切相关，其胞内部分可以与TNFR相关因子(TNFR associated factor)家族多个成员相互作用，既能通过JNK和p38途径介导T细胞的凋亡，又能通过NF-κB途径介导细胞的活化。CD30激活后很快被胞外蛋白酶降解，形成可溶性的sCD30。正常情况下，人体血清中的sCD30含量很低，但在病理状态下，sCD30含量明显升高，可作为疾病诊断的指标。sCD30在血清中的含量可作为HL和ALCL患者的肿瘤检测标志物。

对于难治性和复发性HL和ALCL的治疗始终是个难题，但是近来靶向治疗的出现为这些患者带来了新的希望。近20多年来单克隆抗体已在肿瘤治疗领域得到广泛应用，自从第一代抗CD30单克隆抗体SGN-30、MDX-060第二代抗CD30单克隆抗体MDX-1403、XmAb第三代抗CD30单克隆抗体SGN-35出现以来，在霍奇金淋巴瘤和间变性大细胞淋巴瘤治疗方面有重大突破，改变了传统的治疗方法，增加了CD30阳性患者的生存期，但是临床上依然存在诸多问题，如FDA批准的SGN-35仅用于自身干细胞移植失败或两次既往化疗失败不能接受移植的HL患者以及一次既往化疗失败的ALCL患者，而肿瘤患者早期需先接受化疗，会产生耐药性和毒副作用。随着基因工程技术的发展，CAR-T(Chimeric Antigen Receptor T-CellImmunotherapy)治疗方案的不断进步，针对CD30靶点以及对CD30肿瘤发生发展机制的研究，将大大改变CD30阳性肿瘤的治病现状，为更多患者带来曙光。

CAR全称是ChimericAntigen Receptor，即嵌合抗原受体。完整的CAR结构包括：抗原结合区(scFv，单链抗体，识别肿瘤相关抗原的抗体片段)；跨膜连接区；胞内信号区(T细胞活化基序，CD3胞内信号域ITAM)。[Eleanor J.Cheadle，et al.CAR T cells:drivingthe road from the laboratory to the clinic.Immunological Reviews2014.Vol.257:91–106]。靶向CD30的CAR-T细胞治疗通过分离患者自身的T细胞，用编码CAR的慢病毒载体进行编程以特异性靶向CD30，从而识别和清除CD30阳性的恶性肿瘤细胞。CD30为靶点的CART疗法效果显著、研究广泛，已成为多数临床研究机构开展基因修饰T细胞治疗研究的模式疗法。然而，靶向CD30的嵌合抗原受体大多采用鼠源的scFv，其存在免疫原性，机体会产生人抗鼠抗体，影响CAR-T细胞在体内的长期存活，容易造成复发。

发明内容

为解决以上问题，本发明提供了一种人源的靶向CD30的嵌合抗原受体，所述人源嵌合抗原受体包含人源的抗CD30的单链抗体、胞外铰链区、跨膜结构域和细胞内信号结构域，所述人源的抗CD30的单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。